2001
Sledování stability transgenu u Drosophila melanogaster pomocí teplotní gredientové gelové elektroforézy a sekvencování
SKALICKÁ, Kamila a Karel CHROUSTZákladní údaje
Originální název
Sledování stability transgenu u Drosophila melanogaster pomocí teplotní gredientové gelové elektroforézy a sekvencování
Název anglicky
Stability of trangene in Drosophila melanogaster studiyng by temperature gradient gel electrophoresis and sequencing
Autoři
Vydání
Brno, V. Pracovní setkání biochemiků a molekulárních biologů, s. 55-56, Sborník příspěvků, 2001
Nakladatel
Masarykova univerzita v Brně
Další údaje
Jazyk
čeština
Typ výsledku
Stať ve sborníku
Obor
Genetika a molekulární biologie
Utajení
není předmětem státního či obchodního tajemství
Označené pro přenos do RIV
Ano
Kód RIV
RIV/00216224:14310/01:00003117
Organizační jednotka
Přírodovědecká fakulta
ISBN
80-210-2538-7
Klíčová slova anglicky
transgenic Drosophila melanogaster; DGGE
Změněno: 2. 3. 2001 12:10, RNDr. Ing. Karel Chroust, Ph.D.
V originále
Drosophila melanogaster je v dnešní době široce vyhledávaný modelový organizmus. Vyznačuje se relativně malým genomem (~180 Mb, ~13 600 genů) a stává se častým hostitelem cizorodých genů, které jsou do jejího genomu nejčastěji vnášeny pomocí vektorů odvozených od P elementu. Cílem naší práce bylo sledování stability transgenu u kmene P-1152, který má v cytologické oblasti 1A (chromozom X) stabilně začleněn genový konstrukt P-lacZ-ry-adh. Mutace byly vyvolávány pomocí silného metylačního činidla N-nitroso-N-methylurea (MNU) u larev druhého nebo třetího instaru, které byly chronicky exponovány různým koncentracím vodných roztoků MNU. Pro sledování možných mutačních změn ve jmenovaném transgenu byli vybíráni hemizygotní jedinci. Pomocí polymerázové řetězové reakce byl amplifikován 309 pb dlohý úsek transgenu lacZ, který byl analyzován pomocí teplotní gradientové gelové elektroforézy (TGGE) a sekvencováním.
Anglicky
The fly Drosophila melanogaster is one of the most intensively studied organisms in biology. The relatively small genome makes it a streamlined animal genome ideal for genetic analysis. The Drosophila genome is ~180 Mb in size and encodes ~13.600 genes. It has four chromosomes. We are interested in analysing stability of a transgenes which were inserted to Drosophila genome by P elements transposition. Temperature Gradient Gel Electrophoresis (TGGE) is a new and powerful electrophoresis method for separation of nucleic acids or for analysis of proteins. TGGE system, compare with standard electrophoresis methods, adds an additional parameter for separation, namely the conformation (shape) of molecules. The shape is mostly determined by the secondary and tertiary structure of the molecule and can be changed by external influences like temperature, salt concentration, pH etc. TGGE uses Tm to identify DNA which differs in a sequence among a mixture or molecules of the same size.
Návaznosti
| MSM 143100008, záměr |
|