2002
On-column derivatizace v kapilární zónové elektroforéze
ŠEVČÍKOVÁ, Petra a Zdeněk GLATZZákladní údaje
Originální název
On-column derivatizace v kapilární zónové elektroforéze
Název anglicky
On-column derivatization in CZE
Autoři
ŠEVČÍKOVÁ, Petra (203 Česká republika) a Zdeněk GLATZ (203 Česká republika, garant)
Vydání
2002. vyd. Olomouc, Book of abstracts of Developments in Chromatography and Electrophoresis & Chiranal 2002, s. 29-29, 2002
Nakladatel
Česká společnost chemická - skupina pro chromatografii a elektroforézu
Další údaje
Jazyk
čeština
Typ výsledku
Stať ve sborníku
Obor
10600 1.6 Biological sciences
Stát vydavatele
Česká republika
Utajení
není předmětem státního či obchodního tajemství
Kód RIV
RIV/00216224:14310/02:00006229
Organizační jednotka
Přírodovědecká fakulta
ISBN
80-86238-24-5
Klíčová slova anglicky
derivatization; on-column; CZE
Štítky
Změněno: 19. 5. 2009 18:44, prof. RNDr. Zdeněk Glatz, CSc.
V originále
Kapilární zónová elektroforéza je relativně nová analytická metoda, jež v současné době zaznamenává obrovský rozvoj. Její hlavní výhodou je značná diverzita v aplikačních možnostech, umožňuje analýzu nízkomolekulárních i vysokomolekulárních látek, analýzu látek iontového i neiontového charakteru. Použité mechanismy, které se u této metody uplatňují jsou přitom odlišné od mechanismů uplatňovaných při chromatografických analýzách, což z ní dělá komplementární analytickou metodu vzhledem k chromatografii. Kapilární zónová elektroforéza přinesla řadu dalších výhod - vysokou účinnost a rychlost analýzy, malé množství vzorku a použitého pufru a s tím související malé množství odpadů. Úzký průměr separační kapiláry, který umožňuje již zmiňované výhody, je však zodpovědný za podstatnou limitaci této metody, kterou je nízká koncentrační citlivost. Přestože absolutní citlivost je díky malým dávkovaným objemům extrémně vysoká, koncentrační citlivost je především při použití spektrofotometrické detekce nižší než je tomu u HPLC. Jednou z možností, jak tento problém řešit je použít derivatizaci. Derivatizaci lze v CZE provádět před, po, nebo během vlastní elektroforetické separace. Derivatizace prováděna před elektroforetickou separací je označována jako pre-column předkolonová derivatizace. Je při ní samozřejmě ovlivněna nejenom detekovatelnost analytu, ale i jeho separační vlastnosti. Tímto způsobem je prováděna většina derivatizačních reakcí v CZE. Derivatizace prováděna po elektroforetické separaci je označována jako post-column pokolonová derivatizace. Tento přístup je vhodný především v případě, kdy vznikající deriváty nejsou stabilní. Zásadní nevýhodou tohoto uspořádání však je potřeba speciálního zařízení reaktoru, jehož instalace může být problémem ve většině komerčních přístrojů. Posledním vývojem v derivatizačních technikách v CZE je derivatizace prováděná během vlastní elektroforetické separace on-column derivatizace, při které počáteční část kapiláry slouží jako reakční prostor. Analyt a derivatizační činidlo jsou dávkovány do kapiláry za sebou, k jejich promíchání a tedy k reakci dojde díky jejich rozdílné elektroforetické mobilitě. A právě uvedené problematice je věnována tato přednáška. Ve stručnosti jsou podány základní principy uvedené techniky spolu s nejdůležitějšími aplikačními směry. Hlavní pozornost je pak věnována možnosti využití on-column reakce biologicky a chemicky významných thiolů (GSH, DTT) s 2,2-dipyridyldisulfidem pro jejich detekci při elektroforetických separacích.
Anglicky
The latest development in derivatization in capillary electrophoresis is on-column mode. In this set-up a derivatization reaction is performed during the electrophoretic separation. In principle, the front end of the capillary is used as the reaction chamber. The analyte and the reagent are injected separately and are mixed because of their different electrophoretic mobilities. Various on-column reactions have been demonstrated so far however only for derivatization of the amino group containing compounds. In all these applications the simplified derivatization scheme is the same. The detector nonresponding analytes A, B and C are converted into the derivatives AX, BX and CX that have enhanced detector response properties, in the chemical reaction with the derivatization reagent X : A + B + C + .... + X > AX + BX + CX + .... In this study a new type of on-column reaction detection is reported. The analytes A, B, and C react with the reagent XX forming the derivatives AX, BX and CX, and a reaction by-product X. In contrast to the methods mentioned above, this highly absorbing by-product X is used for the detection : A + B + C + .... + XX > AX + BX + CX + .... n X Considering that the by-product X is identical for all analytes, the separation of the analytes has to be performed before the reaction. As an example of the utility of this concept the thiol-disulfide exchange reaction of 2,2-dipyridyldisulphide DPDS was used for detection of thiol RSH.
Návaznosti
| GA525/00/0785, projekt VaV |
|