2004
Příprava vzorku pro analýzu proteomu leukemických buněk BM2 dvourozměrnou elektroforézou
VÁŇA, Petr a Jan ŠMARDAZákladní údaje
Originální název
Příprava vzorku pro analýzu proteomu leukemických buněk BM2 dvourozměrnou elektroforézou
Název anglicky
Sample preparation for proteom analysis of leukemic cells BM2 using two-dimensional electrophoresis
Autoři
VÁŇA, Petr (203 Česká republika) a Jan ŠMARDA (203 Česká republika, garant)
Vydání
Mělník, 1. česká proteomická konference, s. 24-24, 2004
Nakladatel
Středisko vědeckotechnických informací UŽFG AV ČR
Další údaje
Jazyk
čeština
Typ výsledku
Stať ve sborníku
Obor
30200 3.2 Clinical medicine
Stát vydavatele
Česká republika
Utajení
není předmětem státního či obchodního tajemství
Kód RIV
RIV/00216224:14310/04:00011469
Organizační jednotka
Přírodovědecká fakulta
Klíčová slova anglicky
Two-dimensional electrophoresis; proteome analysis; sample preparation
Změněno: 21. 6. 2004 16:16, prof. RNDr. Jan Šmarda, CSc.
V originále
Výsledek dvourozměrné elektroforézy (2D) proteinů výnamně závisí na způsobu přípravy vzorku. Cílem této práce bylo stanovit optimální podmínky pro přípravu vzorku kuřecích monoblastů transormovaných onkogenem v-myb. Modifikací lyzačního (9 M urea, 2 % NP-40, 3 % CHAPS, 70 mM DTT, 2 % ampholyte pH 8-10.5) a rehydratačního pufru (8 M urea, 4 % CHAPS, 100 mM DTT, 0.001 % bromphenol blue, 0.2 % ampholyte pH 3-10)přidáním thiomočoviny jsme zřetelně zvýšili počet proteinů rozlišitelných v 2D gelu. Sonikací vzorku jsme dále zvýšili počet a densitu proteinů na elektroforetogramu. Přítomnost thiomočoviny v lyzačním/rehydratačním pufru a sonikace zvýšila počet rozlišitelných proteinových skvrn přibližně osmkrát. Tyto experimentální podmínky použijeme při analýze proteomu během diferenciace monoblastů BM2.
Anglicky
Quality of two-dimensional (2D) electrophoresis is dependent on the way of sample preparation. The aim of this study was to set up optimal conditions for preparation of the sample of v-myb-transformed chicken BM2 monoblasts to get a high number of resolved proteins in 2D gel. Starting composition of both lysis (9 M urea, 2 % NP-40, 3 % CHAPS, 70 mM DTT and 2 % ampholyte pH 8-10.5) and rehydratation buffers (8 M urea, 4 % CHAPS, 100 mM DTT, 0.001 % bromphenol blue and 0.2 % ampholyte pH 3-10) have been modified by addition of thiourea causing clear increase of the number of protein spots detectable in 2D gel. In addition, sonication of the sample further increased the number and density of resolved proteins. The presence of thiourea in the lysis/rehydratation buffers and sonication increased the number of protein spots resolved in 2D gel about 8-fold. These experimental conditions are going to be used in analysis of proteome during terminal differentiation of BM2 monoblasts.
Návaznosti
| GA301/03/1055, projekt VaV |
|