2005
Study of Fluorescently Labelled Peptides and Small Proteins Using Capillary Electrophoresis Combined with Laser Induced Fluorescence and MALDI MS Detection
VRÁBEL, Patrik, Petr TÁBORSKÝ, Markéta RYVOLOVÁ, Helena ŘEHULKOVÁ, Josef HAVEL et. al.Základní údaje
Originální název
Study of Fluorescently Labelled Peptides and Small Proteins Using Capillary Electrophoresis Combined with Laser Induced Fluorescence and MALDI MS Detection
Název česky
Studium fluorescenčně značených peptidů a malých proteinů pomocí kapilární elektroforézy s laserem indukovanou detekcí kombinovanou s hmotnostní spektrometrií MALDI.
Autoři
VRÁBEL, Patrik (203 Česká republika, garant, domácí), Petr TÁBORSKÝ (203 Česká republika, domácí), Markéta RYVOLOVÁ (203 Česká republika, domácí), Helena ŘEHULKOVÁ (203 Česká republika, domácí), Josef HAVEL (203 Česká republika, domácí) a Jan PREISLER (203 Česká republika, domácí)
Vydání
8. vyd. Praha, Collection Symposium Series, Biollogicaly Active Peptides, od s. 103-106, 4 s. 2005
Nakladatel
Institute of Organic Chemistry and Biochemistry, Academy of Sciences of the Czech Republic
Další údaje
Jazyk
angličtina
Typ výsledku
Stať ve sborníku
Obor
10406 Analytical chemistry
Stát vydavatele
Česká republika
Utajení
není předmětem státního či obchodního tajemství
Forma vydání
tištěná verze "print"
Odkazy
Kód RIV
RIV/00216224:14310/05:00012704
Organizační jednotka
Přírodovědecká fakulta
ISBN
80-86241-26-2
Klíčová slova anglicky
Derivatization; Fluorescent labelling; Capillary Electrophoresis; MALDI Mass Spectrometry; Peptides and Proteins
Štítky
Změněno: 11. 4. 2013 16:30, prof. Mgr. Jan Preisler, Ph.D.
V originále
In this work, we apply CE-LIF, CE-UV and CE - Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry (MALDI TOFMS) to investigate derivatization of model peptides and small proteins with rhodamine-based fluorescent reagents, which are compatible with the wavelength of frequency doubled diode pumped Nd:YAG excitation laser (532 nm). While the LIF detection mode is needed for sensitive detection, the MALDI TOFMS analysis can reveal the mass of analytes. Both derivatized and non-derivatized peptides and proteins, the number of fluorescent labels per peptide/proteins and other product of derivatization process can be detected directly from reaction mixtures or after separation. Thus, MALDI TOFMS serves for additional identification of peaks present in CELIF or CEUV electropherograms. For off-line coupling of CE with MALDI MS, subatmospheric deposition interface was used. An examples of final sensitive CELIF separation of derivatized peptides and small proteins are given. Main advantages and disadvantages of LIF, absorbance and MS detector for capillary electrophoresis of polypeptides are disscused. Attention is paid to detection limits in practical analysis.
Česky
V této práci aplikujeme metody CELIF, CEUV a CE-MALDITOF MS pro analýzu modelových peptidů a proteinů derivatizovaných fluorescenčními barvivy založenými na rhodaminu. Fluorescence připravených rhodaminových derivátů je excitovatelná snadno dostupným pevnolátkovým laserem - diodově pumpovaným Nd:YAG s dvojitě násobenou frekvencí a vlnovou délkou 532 nm. Laserem indukovaná fluorescenční detekce umožňuje velmi citlivé stanovení látek. Podmínkou aplikovatelnosti metody je však dobrá optimalizace celého postupu derivatizace a spolehlivá identifikace elektroferogramu z metody CELIF nebo CEUV. K tomuto účelu je využito laboatorně sestavená konstrukce pro kombinaci CE s hmotnostně spektrometrickou detekcí MALDITOF. V práci jsou na separacích derivatizovaných směsí peptidů a malých proteinů demonstrovány možnosti derivatizace pro 532 nm LIF detektor, a je diskutována citlivost stanovení reálných analytů včetně porovnání s metodou CE bez použití derivatizace a LIF detekce.
Návaznosti
| GA203/03/0515, projekt VaV |
| ||
| MSM0021622415, záměr |
|