Identifikace regulátorů genové exprese u Treponema pallidum.

ČEJKOVÁ, Darina a David ŠMAJS. Identifikace regulátorů genové exprese u Treponema pallidum. In Sborník příspěvků IX. Pracovního setkání biochemiků a molekulárních biologů. Brno: Přírodovědecká fakulta MU. s. 5. ISBN 80-210-3635-4. 2005.

Základní údaje

• Originální název: Identifikace regulátorů genové exprese u Treponema pallidum.
• Název anglicky: Identification of gene expression regulators in Treponema pallidum.
• Autoři: ČEJKOVÁ, Darina a David ŠMAJS.
• Vydání: Brno, Sborník příspěvků IX. Pracovního setkání biochemiků a molekulárních biologů, s. 5-5, 2005.
• Nakladatel: Přírodovědecká fakulta MU

Další údaje

• Originální jazyk: čeština
• Typ výsledku: Stať ve sborníku
• Obor: Genetika a molekulární biologie
• Stát vydavatele: Česká republika
• Utajení: není předmětem státního či obchodního tajemství
• Organizační jednotka: Lékařská fakulta
• ISBN: 80-210-3635-4
• Klíčová slova anglicky: Treponema pallidum ssp. pallidum; regulation of gene expression
• Štítky: regulation of gene expression, Treponema pallidum ssp. pallidum

Anotace

Metodou real-time RT PCR jsme vyšetřili regulační funkci treponemálních genů rpoN (kódujícího sigma-54 faktor) a fhlA (kódujícího domnělý transkripční faktor). Tyto geny byly naklonovány do expresních plazmidů pBAD/HisB kompatibilních s replikačním systémem BAC. Exprese klonovaných genů byla regulována koncentrací arabinózy v kultivačním mediu. Vzniklé konstrukty obsahovaly izolovaně naklonované geny i plazmidy obsahující oba geny současně. Vyšetřili jsme růstovou křivku kmene DH10B s rekombinantními plazmidy za aerobních a semianaerobních podmínek Za neindukovaných aerobních podmínek roste kmen nesoucí konstrukt s oběma geny rpoN a fhlA výrazně pomaleji než ostatní vzorky. Po indukci arabinózou pozorujeme pomalejší růst u všech kmenů E. coli nesoucí geny rpoN a fhlA a také u kmene nesoucího konstrukt s oběma geny rpoN a fhlA. Protože T. pallidum nelze kultivovat v podmínkách in vitro, expresi treponemálních genů jsme monitorovali v 19 klonech BAC knihovny T. pallidum v E. coli DH10B. Konstrukty s geny rpoN a fhlA byly transformovány do E. coli DH10B s kosmidy DSTP147 a DSTP085. Z těchto kmenů byla izolována RNA 60 a 120 minut po indukci arabinózou a hladina transkriptů vyšetřena kvantitativní RT PCR. Nejvíce jsou regulovány geny TP 9 (tprA), TP 28 (předpovězený gen pro hemolysin), TP 30 (groEL), TP 1037 (hlyIII) a TP 1038 (TpF1). Regulační proteiny RpoN a FhlA přitom spolupracují na pozitivní regulaci transkripce těchto genů.

Anotace anglicky

The possible regulatory functions of two treponemal genes, rpoN (encoding sigma-54 factor) and fhlA (encoding putative transcriptional regulator) were tested using real-time RT PCR. Genes TP0009 (tprA), TP0028 (putative hemolysin gene), TP0030 (groEL), TP1037 (hlyIII) and TP1038 (TpF1)were found to be regulated by RpoN a FhlA proteins.

Návaznosti

• GA310/04/0021, projekt VaV: Název: Postgenomické studie syfilitické spirochety Treponema pallidum

Investor: Grantová agentura ČR, Postgenomické studie syfilitické spirochety Treponema pallidum

• MSM0021622415, záměr: Název: Molekulární podstata buněčných a tkáňových regulací

Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Molekulární podstata buněčných a tkáňových regulací

• NI7351, projekt VaV: Název: Komparativní genomika patogenních spirochet rodu Treponema: cesta k sekvenčně specifické diagnostice

Investor: Ministerstvo zdravotnictví ČR, Komparativní genomika patogenních spirochet rodu Treponema: cesta k sekvenčně specifické diagnostice