J 2007

Study of substrate inhibition by electrophoretically mediated microanalysis in partially filled capillary.

PAPEŽOVÁ, Kateřina, Tomáš NĚMEC, Radka CHALOUPKOVÁ a Zdeněk GLATZ

Základní údaje

Originální název

Study of substrate inhibition by electrophoretically mediated microanalysis in partially filled capillary.

Název česky

Studium substrátové inhibice metodou EMMA v kombinaci s technikou částečného plnění kapiláry

Autoři

PAPEŽOVÁ, Kateřina (203 Česká republika), Tomáš NĚMEC (203 Česká republika), Radka CHALOUPKOVÁ (203 Česká republika) a Zdeněk GLATZ (203 Česká republika, garant)

Vydání

Journal of Chromatography A, Amsterdam, Elsevier, 2007, 0021-9673

Další údaje

Jazyk

angličtina

Typ výsledku

Článek v odborném periodiku

Obor

10600 1.6 Biological sciences

Stát vydavatele

Nizozemské království

Utajení

není předmětem státního či obchodního tajemství

Impakt faktor

Impact factor: 3.641

Kód RIV

RIV/00216224:14310/07:00020038

Organizační jednotka

Přírodovědecká fakulta

UT WoS

000247049200043

Klíčová slova anglicky

CE; EMMA substrate; inhibition; haloalkane dehalogenase

Štítky

Příznaky

Mezinárodní význam, Recenzováno
Změněno: 29. 6. 2008 05:54, Olga Křížová

Anotace

ORIG CZ

V originále

Substrate inhibition is a common phenomenon in enzyme kinetics. We report here for the first time its study by a combination of the electrophoretically mediated microanalysis (EMMA) methodology with a partial filling technique. In this set-up, the part of capillary is filled with the buffer best for the enzymatic reaction whereas, the rest of the capillary is filled with the background electrolyte optimal for separation of substrates and products. In the case of haloalkane dehalogenase, a model enzyme selected for this study, the enzymatic reaction was performed in 20 mM glycine buffer (pH 8.6) whereas 20 mM beta-alanine - hydrochloric acid buffer (pH 3.5) was used as a background electrolyte in combination with direct detection at 200 nm. The whole study was performed on poorly soluble brominated substrate - 1,2-dibromoethane. As a result it was first necessary to find the compromise between the concentrations of the enzyme and the substrate preserving both the adequate sensitivity of the assay and at the same time the attainable substrate solubility. By means of the developed EMMA methodology we were able to determine the Michaelis constant (KM) as well as the substrate inhibition constant (KSI). The value of KM and KSI obtained were 7.7 mM and 1.1 mM respectively. Observation of the substrate inhibition of haloalkane dehalogenase by 1,2-dibromoethane is in accordance with previous literature data.

Česky

Byla vypracována technika pro studium substrátové inhibice metodou EMMA v kombinaci s technikou částečného plnění kapiláry

Návaznosti

GA203/06/0047, projekt VaV
Název: Využití kapilární elektroforézy pro studium metabolismu léčiv
Investor: Grantová agentura ČR, Využití kapilární elektroforézy pro studium metabolismu léčiv
LC06023, projekt VaV
Název: Integrované bioanalytické technologie pro mikroanalýzy a diagnostiku s využitím LIF a hmotnostní spektrometrie
Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Integrované bioanalytické technologie pro mikroanalýzy a diagnostiku s využitím LIF a hmotnostní spektrometrie
MSM0021622413, záměr
Název: Proteiny v metabolismu a při interakci organismů s prostředím
Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Proteiny v metabolismu a při interakci organismů s prostředím