J 2007

Study of recombinant cytochrome P450 2C9 activity with diclofenac by micellar electrokinetic capillary chromatography

KONEČNÝ, Jiří, Jan JUŘICA, Josef TOMANDL a Zdeněk GLATZ

Základní údaje

Originální název

Study of recombinant cytochrome P450 2C9 activity with diclofenac by micellar electrokinetic capillary chromatography

Název česky

Studium reakce rekombinantního cytochromu P450 2C9 s dikofenakem pomocí MEKC

Autoři

KONEČNÝ, Jiří (203 Česká republika, domácí), Jan JUŘICA (203 Česká republika, domácí), Josef TOMANDL (203 Česká republika, domácí) a Zdeněk GLATZ (203 Česká republika, garant, domácí)

Vydání

Electrophoresis, Weinheim, VHC, 2007, 0173-0835

Další údaje

Jazyk

angličtina

Typ výsledku

Článek v odborném periodiku

Obor

10600 1.6 Biological sciences

Stát vydavatele

Spojené státy

Utajení

není předmětem státního či obchodního tajemství

Impakt faktor

Impact factor: 3.609

Kód RIV

RIV/00216224:14310/07:00020039

Organizační jednotka

Přírodovědecká fakulta

UT WoS

000246116100009

Klíčová slova anglicky

drug metabolism; cytochrome P450 2C9; diklofenac; MEKC

Štítky

Příznaky

Mezinárodní význam, Recenzováno
Změněno: 6. 6. 2012 08:44, doc. RNDr. Josef Tomandl, Ph.D.

Anotace

ORIG CZ

V originále

Cytochrome P450 2C9 (CYP2C9) is one of the most important isoform in human liver involved in the metabolism of a large number of therapeutic agents. The aim of this communication is to demonstrate the applicability of capillary electrophoresis for the determination of the enzymatic activity of CYP2C9 with diclofenac as a probe substrate. Micellar electrokinetic capillary chromatography (MEKC) with SDS as a pseudostationary phase was used for this purpose. Compared to other assays, the MEKC based method is rapid, can be automated, and requires only small quantity of enzymes and substrate. Moreover, the enzymatic reaction can be monitored with high sensitivity and reproducibility even when the reaction mixture is used for the analysis without any pre-treatment. The kinetic study on the given enzymatic reaction was also performed since basic characterization of drug biotranformation generally begins with the enzyme kinetic analysis of metabolite formation. As a result Michaelis constant and maximum reaction velocity were evaluated, the values Km 3.44 uM, respectively 19.78 nmol.min-1.nmol-1 were in agreement with the literature data. On the other hand the slight deviation from typical Michaelis-Menten kinetics with a weak positive cooperativity was found at diclofenac concentration below 2 uM. The same atypical kinetic behaviour of CYP2C9 was also observed by other authors.

Česky

Byla vyprcována metoda pro stanovení aktivity CYP P450 2C9 pomocí MEKC. Metoda byla rovněž použita pro stanovení kinetických parametrů daného enzymu.

Návaznosti

GA203/06/0047, projekt VaV
Název: Využití kapilární elektroforézy pro studium metabolismu léčiv
Investor: Grantová agentura ČR, Využití kapilární elektroforézy pro studium metabolismu léčiv
LC06023, projekt VaV
Název: Integrované bioanalytické technologie pro mikroanalýzy a diagnostiku s využitím LIF a hmotnostní spektrometrie
Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Integrované bioanalytické technologie pro mikroanalýzy a diagnostiku s využitím LIF a hmotnostní spektrometrie
MSM0021622413, záměr
Název: Proteiny v metabolismu a při interakci organismů s prostředím
Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Proteiny v metabolismu a při interakci organismů s prostředím