Kombinace metody EMMA s technikou dávkování z krátkého konce kapiláry

NĚMEC, Tomáš a Zdeněk GLATZ. Kombinace metody EMMA s technikou dávkování z krátkého konce kapiláry. In Proceeding of 15th International Conference "Chromatographic Methods and Human Health". Bratislava: Slovenská chemická společnost, 2006, s. 10-10. ISSN 1335-5236.

Základní údaje

• Originální název: Kombinace metody EMMA s technikou dávkování z krátkého konce kapiláry
• Název česky: Kombinace metody EMMA s technikou dávkování z krátkého konce kapiláry
• Název anglicky: Integration of short-end injection procedure into EMMA methodology
• Autoři: NĚMEC, Tomáš a Zdeněk GLATZ.
• Vydání: Bratislava, Proceeding of 15th International Conference "Chromatographic Methods and Human Health" od s. 10-10, 1 s. 2006.
• Nakladatel: Slovenská chemická společnost

Další údaje

• Originální jazyk: čeština
• Typ výsledku: Stať ve sborníku
• Obor: 10600 1.6 Biological sciences
• Stát vydavatele: Slovensko
• Utajení: není předmětem státního či obchodního tajemství
• Organizační jednotka: Přírodovědecká fakulta
• ISSN: 1335-5236
• Klíčová slova anglicky: EMMA; short end injection
• Štítky: EMMA, short end injection

Anotace

Před čtrnácti lety Bao a Reginer vyvinuli novou metodu sledování enzymatických reakcí pomocí kapilární elektroforézy (1). U této metody, kterou nazvali Electrophoretically Mediated Microanalysis (EMMA, elektroforeticky zprostředkovaná mikroanalýza), je kapilára využita nejen k separaci, ale i jako reakční prostředí pro vlastní enzymovou reakci. Od svého objevu byla metoda EMMA použita na studium celé řady enzymových i neenzymových systémů (2-4). V této práci je demonstrována možnost kombinace metody EMMA s technikou dávkování z krátkého konce kapiláry, což je technika vyvinutá Altriou a spol. pro dosažení kratších separačních časů v kapilarní elektroforéze (5). Tato kombinace si přitom zachovává výhody obou těchto instrumentálních přístupů. Zatímco dávkování z krátkého konce kapiláry zkracuje dobu analýzy a zvyšuje její citlivost, metoda EMMA umožňuje její plnou automatizaci a přináší značné snížení spotřeby enzymového preparátu a substrátů, což bylo dokumentováno na kinetických studiích enzymů haloalkandehalogenasy (jednosusbtrátová enzymová reakce) a rhodanasy (dvoususbtrátová enzymová reakce).

Anotace anglicky

The possibility of integration of the short-end injection mode in the EMMA methodology is demonstrated in this work on the kinetic studies of haloalkane dehalogenase and rhodanese enzymatic reactions. The essential validations of the EMMA methods combined with the short-end and long-end injection modes were performed first to confirm their accuracy. The qualitative and quantitative parameters of both approaches such as repetabilities of migration times and peak areas, limits of detection and correlation coefficients were in acceptable ranges. In addition estimated Michaelis constants for the corresponding substrate(s) were comparable being in accordance with previous literature data. Moreover the ping-pong reaction mechanism of rhodanese reaction was confirmed by means of both injection modes. This combination thus preserves the benefits of these instrumental approaches. Whereas the short-end injection procedure brought 5 to 6.5 times reduction of the analysis time and 2.5 to 4 times increase of the sensitivity, the EMMA methodology allowed full automatization of the assays while the whole kinetic studies needed only 20 ul of corresponding enzyme preparation.

Návaznosti

• GA203/06/0047, projekt VaV: Název: Využití kapilární elektroforézy pro studium metabolismu léčiv

Investor: Grantová agentura ČR, Využití kapilární elektroforézy pro studium metabolismu léčiv

• LC06023, projekt VaV: Název: Integrované bioanalytické technologie pro mikroanalýzy a diagnostiku s využitím LIF a hmotnostní spektrometrie

Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Integrované bioanalytické technologie pro mikroanalýzy a diagnostiku s využitím LIF a hmotnostní spektrometrie

• MSM0021622413, záměr: Název: Proteiny v metabolismu a při interakci organismů s prostředím

Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Proteiny v metabolismu a při interakci organismů s prostředím