2006
Expression of Glycosylated Haloalkane Dehalogenase LinB in Pichia pastoris.
NAKAMURA, Takashi; Marcel ZAMOCKY; Zbyněk ZDRÁHAL; Radka CHALOUPKOVA; Marta MONINCOVÁ et. al.Základní údaje
Originální název
Expression of Glycosylated Haloalkane Dehalogenase LinB in Pichia pastoris.
Název česky
Exprese glykosylovane haloalkan dehalogenazy LinB v Pichia pastoris.
Autoři
NAKAMURA, Takashi; Marcel ZAMOCKY; Zbyněk ZDRÁHAL; Radka CHALOUPKOVA; Marta MONINCOVÁ; Zbyněk PROKOP; Yuji NAGATA a Jiří DAMBORSKÝ
Vydání
PROTEIN EXPRESSION AND PURIFICATION, 2006, 1046-5928
Další údaje
Jazyk
angličtina
Typ výsledku
Článek v odborném periodiku
Obor
10600 1.6 Biological sciences
Stát vydavatele
Spojené státy
Utajení
není předmětem státního či obchodního tajemství
Odkazy
Impakt faktor
Impact factor: 1.867
Kód RIV
RIV/00216224:14310/06:00017437
Organizační jednotka
Přírodovědecká fakulta
UT WoS
000235902700010
Klíčová slova anglicky
Dehalogenation; Pichia pastoris; Heterologous expression; Glycosylation; Thermal stability; Catalytic activity
Štítky
Příznaky
Mezinárodní význam, Recenzováno
Změněno: 26. 6. 2009 10:34, prof. RNDr. Zbyněk Zdráhal, Dr.
V originále
Heterologous expression of the bacterial enzyme haloalkane dehalogenase LinB from Sphingomonas paucimobilis UT26 in methylotrophic yeast Pichia pastoris is reported. The haloalkane dehalogenase gene linB was subcloned into the pPICZaA vector and integrated into the genome of P. pastoris. The recombinant LinB secreted from the yeast was purified to homogeneity and biochemically characterized. The deglycosylation experiment and mass spectrometry measurements showed that the recombinant LinB expressed in P. pastoris is glycosylated with a 2.8 kDa size of high mannose core. The specific activity of the glycosylated LinB was 15.6 +/- 3.7 micromol/min/mg of protein with 1,2-dibromoethane and 1.86 +/- 0.36 micromol/min/mg of protein with 1-chlorobutane. Activity and solution structure of the protein produced in P. pastoris is comparable with that of recombinant LinB expressed in Escherichia coli. The melting temperature determined by the circular dichroism (41.7 +/- 0.3C for LinB expressed in P. pastoris and 41.8 +/- 0.3C expressed in E. coli) and thermal stability measured by specific activity to 1-chlorobutane were also similar for two enzymes. Our results show that LinB can be extracellularly expressed in eukaryotic cell and glycosylation had no effect on activity, protein fold and thermal stability of LinB.
Česky
Je popsana exprese bakterialniho enzymu haloalkan dehalogenazy LinB z bakterie Sphingomonas paucimobilis UT26 v Pichia pastoris.Gen z haloalkan dehalogenazy byl klonovan na vektor a integrovan do genomu P.pastoris.Rekombintni Lin B byl vycisten a zmereny jeho biochemicke vlastnosti.
Návaznosti
| MSM0021622412, záměr |
| ||
| MSM0021622415, záměr |
|