2007
Analýza sigma 54 závislých promotorových oblastí Treponema pallidum.
ČEJKOVÁ, Darina a David ŠMAJSZákladní údaje
Originální název
Analýza sigma 54 závislých promotorových oblastí Treponema pallidum.
Název česky
Analýza sigma 54 závislých promotorových oblastí Treponema pallidum.
Název anglicky
Analysis of sigma 54 dependent promoters of Treponema pallidum.
Autoři
Vydání
Brno, XI. Setkání biochemiků a molekulárních biologů. Sborník příspěvků. od s. 4-5, 2 s. 2007
Nakladatel
Masarykova univerzita v Brně
Další údaje
Jazyk
čeština
Typ výsledku
Stať ve sborníku
Obor
Genetika a molekulární biologie
Stát vydavatele
Česká republika
Utajení
není předmětem státního či obchodního tajemství
Označené pro přenos do RIV
Ne
Organizační jednotka
Lékařská fakulta
ISBN
978-80-210-4234-6
Klíčová slova anglicky
sigma 54 dependent promoters; Treponema pallidum.
Změněno: 27. 6. 2008 12:24, prof. MUDr. David Šmajs, Ph.D.
V originále
Spirocheta T. pallidum ssp. pallidum, mikroaerofilní obligátní lidský patogen, způsobuje pohlavně přenosné onemocnění syfilis, které napadá různé tkáně a orgány. Různá stádia syfilis a schopnost infikovat různé orgány pravděpodobně vyžaduje regulaci genové exprese. Studovali jsme funkci faktoru sigma 54 (RpoN) a jeho pozitivního regulátoru FhlA. Funkcí sigma faktoru je vazba RNA polymerázy k promotoru a zabránění nespecifické iniciace transkripce. Pro studium sigma 54 závislých promotorů byla použita analýza in silico, mapování promotorů pomocí PCR z cDNA (cDNA PCR) a transkripční fúze mezi predikovaným sigma 54 závislým promotorem a luxCDABE geny plazmidu pCS26, které slouží jako reportérový systém pro analýzu míry exprese. S využitím programu PromScan byly identifikovány sigma 54 závislé promotory v genomu T. p. pallidum Nichols. Tyto promotory se nacházejí před TP1038 (tpF1), TP1035 (valS), TP0105 (polA), TP0689 (kódující GTP vázající protein), tRNA Arg 5 (kódující tRNA), TP0324 (kódující hypotetický protein) a TP0816 (kódující hypotetický protein). Lokalizace predikovaného promotoru genu TP1038 byla potvrzena výsledky cDNA PCR. Pomocí QPCR nebo DNA čipů byla experimentálně potvrzena regulace genů TP0105 a TP1038 proteiny RpoN a FhlA. Promotory genů TP0105 (polA) a TP1038 (tpF1) byly naklonovány do vektoru pCS26 a vzniklé konstrukty byly transformovány rekombinantními plazmidy nesoucími geny rpoN a fhlA. U obou promotorů dochází za konstitutivní exprese genů rpoN a fhlA k signifikantnímu vzrůstu luminiscence oproti kontrolám. Uvedené výsledky tedy naznačují přítomnost sigma 54 závislých promotorů v genomu T. pallidum Nichols, které jsou lokalizovány přinejmenším před geny TP0105 a TP1038. K optimální funkci proteinů sigma 54 a FhlA dochází u E. coli za anaerobních podmínek, v kyselém pH a za přítomnosti kyseliny mravenčí. Experimenty s treponemálními geny rpoN a fhlA budou ještě provedeny za těchto podmínek.
Anglicky
Analysis of sigma 54 dependent promoters of Treponema pallidum was performed and described.
Návaznosti
| GA310/07/0321, projekt VaV |
| ||
| MSM0021622415, záměr |
| ||
| NR8967, projekt VaV |
|