Purifikace a krystalizace přijímačové domény receptorové
histidinkinázy CKI1

D 2007

Purifikace a krystalizace přijímačové domény receptorové histidinkinázy CKI1

PEKÁROVÁ, Blanka; Petra BORKOVCOVÁ; Břetislav BRZOBOHATÝ; Ľubica URBANÍKOVÁ; Jan HEJÁTKO et al.

Základní údaje

Originální název

Purifikace a krystalizace přijímačové domény receptorové histidinkinázy CKI1

Název anglicky

Purification and crystallization of the receiver domain of the receptor histidine kinaseCKI1

Autoři

PEKÁROVÁ, Blanka ; Petra BORKOVCOVÁ; Břetislav BRZOBOHATÝ; Ľubica URBANÍKOVÁ; Jan HEJÁTKO a Lubomír JANDA

Vydání

1. vyd. Olomouc (ČR), Bulletin České společnosti experimentální biologie rostlin a Fyziologické sekce Slovenské botanické společnosti, s. 64-64, 2007

Nakladatel

Česká společnost experimentální biologie rostlin

Další údaje

Jazyk

čeština

Typ výsledku

Stať ve sborníku

Obor

Genetika a molekulární biologie

Stát vydavatele

Česká republika

Utajení

není předmětem státního či obchodního tajemství

Odkazy

URL

Organizační jednotka

Přírodovědecká fakulta

ISBN

1213-6670

Klíčová slova anglicky

cytokinins; histidine kinase; CKI1; receiver domain; purification

Štítky

CKI1, cytokinins, HISTIDINE KINASE, purification, receiver domain

Změněno: 16. 7. 2008 13:55, Mgr. Petr Bureš

Anotace

V originále

Cytokininy patří spolu s auxiny ke klíčovým regulátorům růstu rostlin. Potenciálním regulátorem přenosu cytokininového signálu u Arabidopsis thaliana byla identifikována receptorová histidinkináza CKI1. Tato histidinkináza se skládá z extracelulárně lokalizované, na membráně vázané receptorové domény, z intracelulární histidinkinázové domény a přijímačové domény (RD). Vzhledem k velikosti a různosti domén CKI1 je nutné pro určení struktury tohoto proteinu připravit jednotlivé domény samostatně. RD CKI1 byla klonována do expresního vektoru a exprimována v E. coli. Protein byl purifikován ve dvou krocích (Hi Trap Chelating HP se Zn2+ a Hi Load 16/60 Superdex 75) pomocí FPLC systému. Výtěžnost byla ovlivněna složením pufrů, kdy za použití Tris/HCl pufru bylo získáno ~27 mg proteinu/1L bakteriální kultury a při použití fosfátového pufru klesl výtěžek purifikace na ~19 mg/1L bakteriální kultury. Získaný protein byl homogenní za nativních i denaturačních podmínek na PAGE a jeho čistota byla >95%. Stabilita proteinu byla zvýšena za přítomnosti EDTA. Protein byl použit na krystalizační pokusy a byly získány první krystaly proteinu. V současné době jsou podmínky krystalizace optimalizovány.

Návaznosti

LC06034, projekt VaV

Název: Regulace morfogeneze rostlinných buněk a orgánů

Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Regulace morfogeneze rostlinných buněk a orgánů

MSM0021622415, záměr

Název: Molekulární podstata buněčných a tkáňových regulací

Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Molekulární podstata buněčných a tkáňových regulací

Citovat

PEKÁROVÁ, Blanka; Petra BORKOVCOVÁ; Břetislav BRZOBOHATÝ; Ľubica URBANÍKOVÁ; Jan HEJÁTKO a Lubomír JANDA. Purifikace a krystalizace přijímačové domény receptorové histidinkinázy CKI1. In Bulletin České společnosti experimentální biologie rostlin a Fyziologické sekce Slovenské botanické společnosti. 1. vyd. Olomouc (ČR): Česká společnost experimentální biologie rostlin, 2007, s. 64. ISBN 1213-6670.

@inproceedings{744196,
   author = {Pekárová, Blanka and Borkovcová, Petra and Brzobohatý, Břetislav and Urbaníková, Ľubica and Hejátko, Jan and Janda, Lubomír},
   address = {Olomouc (ČR)},
   booktitle = {Bulletin České společnosti experimentální biologie rostlin a Fyziologické sekce Slovenské botanické společnosti},
   edition = {1.},
   keywords = {cytokinins; histidine kinase; CKI1; receiver domain; purification},
   language = {cze},
   location = {Olomouc (ČR)},
   isbn = {1213-6670},
   pages = {64-64},
   publisher = {Česká společnost experimentální biologie rostlin},
   title = {Purifikace a krystalizace přijímačové domény receptorové histidinkinázy CKI1},
   url = {http://rustreg.upol.cz/fyzdny2007},
   year = {2007}
}

TY  - CONF
ID  - 744196
AU  - Pekárová, Blanka - Borkovcová, Petra - Brzobohatý, Břetislav - Urbaníková, Ľubica - Hejátko, Jan - Janda, Lubomír
PY  - 2007
TI  - Purifikace a krystalizace přijímačové domény receptorové histidinkinázy CKI1
PB  - Česká společnost experimentální biologie rostlin
CY  - Olomouc (ČR)
SN  - 12136670
KW  - cytokinins
KW  - histidine kinase
KW  - CKI1
KW  - receiver domain
KW  - purification
UR  - http://rustreg.upol.cz/fyzdny2007
N2  - Cytokininy patří spolu s auxiny ke klíčovým regulátorům růstu rostlin. Potenciálním regulátorem přenosu cytokininového signálu u Arabidopsis thaliana byla identifikována receptorová histidinkináza CKI1. Tato histidinkináza se skládá z extracelulárně lokalizované, na membráně vázané receptorové domény, z intracelulární histidinkinázové domény a přijímačové domény (RD). Vzhledem k velikosti a různosti domén CKI1 je nutné pro určení struktury tohoto proteinu připravit jednotlivé domény samostatně. RD CKI1 byla klonována do expresního vektoru a exprimována v E. coli. Protein byl purifikován ve dvou krocích (Hi Trap Chelating HP se Zn2+ a Hi Load 16/60 Superdex 75) pomocí FPLC systému. Výtěžnost byla ovlivněna složením pufrů, kdy za použití Tris/HCl pufru bylo získáno ~27 mg proteinu/1L bakteriální kultury a při použití fosfátového pufru klesl výtěžek purifikace na ~19 mg/1L bakteriální kultury. Získaný protein byl homogenní za nativních i denaturačních podmínek na PAGE a jeho čistota byla >95%. Stabilita proteinu byla zvýšena za přítomnosti EDTA. Protein byl použit na krystalizační pokusy a byly získány první krystaly proteinu. V současné době jsou podmínky krystalizace optimalizovány.
ER  -

PEKÁROVÁ, Blanka; Petra BORKOVCOVÁ; Břetislav BRZOBOHATÝ; Ľubica URBANÍKOVÁ; Jan HEJÁTKO a Lubomír JANDA. Purifikace a krystalizace přijímačové domény receptorové histidinkinázy CKI1. In \textit{Bulletin České společnosti experimentální biologie rostlin a Fyziologické sekce Slovenské botanické společnosti}. 1. vyd. Olomouc (ČR): Česká společnost experimentální biologie rostlin, 2007, s.~64. ISBN~1213-6670.

Přehled o publikaci