ZEISBERGEROVÁ, Marta, Andrea KLIMÍČKOVÁ a Zdeněk GLATZ. Application of EMMA methodology for on-capillary protein digestion in proteomic research. In Book of Abstracts 22nd International Symposium on MicroScale Bioseparations and Methods for Systems Biology. 1. vyd. Berlin: Prof. Manz, 2008, s. 361-361.
Další formáty:   BibTeX LaTeX RIS
Základní údaje
Originální název Application of EMMA methodology for on-capillary protein digestion in proteomic research
Název česky Využití metofy EMMA pro on-line štěpení proteinů
Autoři ZEISBERGEROVÁ, Marta, Andrea KLIMÍČKOVÁ a Zdeněk GLATZ.
Vydání 1. vyd. Berlin, Book of Abstracts 22nd International Symposium on MicroScale Bioseparations and Methods for Systems Biology, od s. 361-361, 1 s. 2008.
Nakladatel Prof. Manz
Další údaje
Originální jazyk angličtina
Typ výsledku Stať ve sborníku
Obor 10600 1.6 Biological sciences
Stát vydavatele Německo
Utajení není předmětem státního či obchodního tajemství
Organizační jednotka Přírodovědecká fakulta
Klíčová slova anglicky capillary electrophoresis; EMMA; protein digestion; proteomics
Štítky Capillary electrophoresis, EMMA, protein digestion, proteomics
Příznaky Mezinárodní význam, Recenzováno
Změnil Změnila: Mgr. Marta Pelcová, Ph.D., učo 14045. Změněno: 10. 2. 2009 17:40.
Anotace
Sixteen years ago a new application for the evaluation of enzymatic reactions in capillary electrophoresis was proposed and developed by Bao and Regnier. In this method called electrophoretically mediated microanalysis (EMMA), the capillary is used not only as a separation medium but also as a reaction chamber. Since its discovery the EMMA methodology has been utilized in a number of biochemical systems - for assays of enzyme activities, determinations substrates, Michaelis constants, inhibitors and inhibition constants etc. In this work, the EMMA methodology was applied for the on-capillary tryptic digestion of proteins for proteomic reason. The combination of the EMMA methodology with a partial filling technique was used in this study since the pH optimum of trypsin reaction strongly differs from the pH best for the CE separation of peptides. In this set-up the part of the capillary is filled with the buffer best for the tryptic digestion (Tris-HCl buffer pH 8.5) whereas the rest of the capillary with the background electrolyte optimal for peptides separation and certain detection system (phosphate or formate buffer pH 2.5). As the proteins differ in pI the sandwich type of injection was used. The analysed protein is thus injected between two trypsine zones that should ensure their mixing and digestion. The analysis of one protein comprising both the digestion and the peptides separation is thus finished in 1 hour. Compared to in-solution tryptic digestion or trypsin reactors commonly used for this purpose, the EMMA digestion is rapid, can be automated and relatively easily connected with MS detection, and requires only small amount of protein sample.
Anotace česky
Metoda Electroforeticky zprostředkované mikroanalýzy EMMA byla použita on-line štěpení proteinů.
Návaznosti
GA203/06/0047, projekt VaVNázev: Využití kapilární elektroforézy pro studium metabolismu léčiv
Investor: Grantová agentura ČR, Využití kapilární elektroforézy pro studium metabolismu léčiv
LC06023, projekt VaVNázev: Integrované bioanalytické technologie pro mikroanalýzy a diagnostiku s využitím LIF a hmotnostní spektrometrie
Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Integrované bioanalytické technologie pro mikroanalýzy a diagnostiku s využitím LIF a hmotnostní spektrometrie
MSM0021622413, záměrNázev: Proteiny v metabolismu a při interakci organismů s prostředím
Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Proteiny v metabolismu a při interakci organismů s prostředím
VytisknoutZobrazeno: 22. 6. 2024 19:35