Další formáty:
BibTeX
LaTeX
RIS
@proceedings{816660,
author = {Burešová, Ivana and Kupská, Renata and Perutka, Tomáš and Hájek, Roman},
booktitle = {3) IX. Česko-slovenská konference laboratorní hematologie},
keywords = {plasma cells; multiple myeloma; FACS},
title = {První zkušenosti s tříděním plazmatických buněk na mikroskopická skla},
year = {2008}
}
TY - CONF
ID - 816660
AU - Burešová, Ivana - Kupská, Renata - Perutka, Tomáš - Hájek, Roman
PY - 2008
TI - První zkušenosti s tříděním plazmatických buněk na mikroskopická skla
KW - plasma cells
KW - multiple myeloma
KW - FACS
N2 - Úvod: Monoklonální gamapatie, zvláště ve svých počátečních stádiích, jsou charakteristické nízkým zastoupením patologické populace. Nízká čistota jde ruku v ruce s nízkým absolutním počtem buněk, které lze získat z odběru kostní dřeně. Výzkum monoklonálních gamapatií je tak nemyslitelný bez separačních postupů. Daní za čistotu vytříděné populace jsou vyšší ztráty. Jednou z možností, jak snížit požadavky na množství buněk, je využít jejich třídění přímo na mikroskopické sklo pro cytogenetické vyšetření metodami FISH. Tento postup je doporučován i Evropskou myelomovou sítí (EMN). Uvádíme naše první zkušenosti s metodou. Materiál a metody: Pro třídění buněk byla využita mononukleární frakce získaná gradientovou centrifugací z heparinizované kostní dřeně pacientů s monoklonálními gamapatiemi, odebrané do Iscova média. Před tříděním byly buňky označeny protilátkou proti CD138. Parametry buněčného sorteru byly nastaveny speciálně pro třídění na mikroskopické sklo a třídění probíhalo jednak na suché sklo, jednak na něj byly před tříděním aplikovány různé roztoky. Byl sledován jejich vliv na výsledný tvar buněk a jejich čitelnost po obarvení jader a aplikaci fluorescenčních sond. Výsledky: Byly odladěny parametry nastavení sortru pro třídění buněk přímo na mikroskopické sklo. Ukázalo se, že pro použití buněk pro FISH je rozhodující roztok, do kterého budou buňky tříděny, jeho množství a forma aplikace. Integritu a tvar buněk příznivě ovlivňuje např. telecí fetální sérum - ve větší vrstvě ale zhoršuje čitelnost, nebo fixativ, který ale rychle vysychá, což je problém při déletrvajícím třídění. Závěr: Bylo ověřeno, že buňky vytříděné přímo na mikroskopické sklo lze použít pro vyšetření pomocí FISH. Zavedení této metodiky vidíme jako významný krok k výzkumu jedinců s MGUS, kde bývá zastoupení patologické populace často tak nízké, že i při zpracování relativně velkého objemu kostní dřeně lze získat řádově jen desítky tisíc buněk.
ER -
BUREŠOVÁ, Ivana, Renata KUPSKÁ, Tomáš PERUTKA a Roman HÁJEK. První zkušenosti s tříděním plazmatických buněk na mikroskopická skla. In \textit{3) IX. Česko-slovenská konference laboratorní hematologie}. 2008.
|
