2009
CZE separation of cellular energetically important metabolites
MUSILOVÁ, Jindra a Zdeněk GLATZZákladní údaje
Originální název
CZE separation of cellular energetically important metabolites
Název česky
CZE separace energeticky významných buněčných metabolitů
Autoři
Vydání
2009. vyd. Rakousko : Congress and Messe Innsbruck, EURO ANALYSIS 2009, od s. 478 - 478, 1 s. 2009
Nakladatel
Wolfgang Buchberger, Wolfgang Lindner
Další údaje
Jazyk
angličtina
Typ výsledku
Stať ve sborníku
Obor
10600 1.6 Biological sciences
Stát vydavatele
Rakousko
Utajení
není předmětem státního či obchodního tajemství
Označené pro přenos do RIV
Ne
Organizační jednotka
Přírodovědecká fakulta
Klíčová slova česky
kapilární elektroforéza; metabolom; energetické metabolity;
Klíčová slova anglicky
capillary electrophoresis; metabolom; energetic metabolites;
Příznaky
Mezinárodní význam
Změněno: 9. 4. 2010 09:08, prof. RNDr. Zdeněk Glatz, CSc.
V originále
Nucleotides are essential for viability and growth of all living cells. They have at least four important functions; storage and transport of cellular metabolic energy; activation and transfer of precursors for cellular biosynthesis; synthesis of DNA and RNA; control and regulation of cellular metabolism. Their total concentration and distribution of individual species is highly dynamic with changes in environmental conditions. Monitoring the nucleotides pool is able to verify the physiological state of the cell and predict this state due to the presence or rations to each other. Due to the importance of nucleotides for metabolism, numerous methods for their determination in biological samples have been reported, mainly HPLC, CE or TLC. The main aim of this work was to find appropriate conditions for the selective and rapid determination of purine (AMP, ADP, ATP, GMP, GDP, GTP), pyrimidine (CMP, CDP, CTP, UMP, UDP, UTP) nucleotides, adenine coenzymes (NAD+, NADH, NADP+, NADPH) and Acetyl CoA using capillary electrophoresis (CE). Because of low intra and extracellular concentration of these metabolites the capillary zone electrophoresis was combined with the online preconcentration technique field enhanced sample stacking to improve the concentration sensitivities. The determination was performed in a bare fused silica capillary using separation voltage 20 kV (positive polarity) and direct detection at 260, 280 and 340 nm. For method optimization different concentrations of phosphate buffer (from 50 to 80 mM), pH range from 5 to 7 and temperature of capillary from 16 to 25 C were tested. The best resolution was found in the pH range from 5.5 to 6 for each buffer concentration; hence this pH range was examined in detail. Metabolite samples dissolved in deionised water were injected into the capillary hydrodynamically (50 mbar, 14 s).
Česky
Nukleotidy jsou pro životaschopnost a růst buňky velice nezbytné. Zastávají minimálně čtyři důležité funkce: uchování a transport energie, aktivace a přenos prekurzorů biosyntézy, syntéza DNA a RNA, kontrola a regulace buněčného metabolismu. Jejich celková koncentrace i jednotlivé zastoupení je vysoce dynamické se změnami životního prostředí. Monitoring nukleotidů je významný zejména z k ověření fyziologického stavu buňky a nebo k předpovědi stavu buňky na základě získaných výsledků (množství jednotlivých nukleotidů). Z důvodu vysoké důležitosti nukletidů pro metabolismus, bylo vyvinuto hned několik metod pro jejich stanovení v biologických vzorcích, např. HPLC, CE nebo TLC. Hlavním cílem této práce bylo zoptimalizovat podmínky pro selektivní a rychlé stanovení purinových (AMP, ADP, ATP, GMP, GDP, GTP), pyrimidinových (CMP, CDP, CTP, UMP, UDP, UTP) nukleotidů, adeninových koenzymů (NAD+, NADH, NADP+, NADPH) a Acetylu CoA pomocí kapilární elektroforézy (CE). Ke zvýšení koncentrační citlivosti CE byla využita jedna z prekoncentračních technik, tzv. stacking.
Návaznosti
| LC06023, projekt VaV |
| ||
| MSM0021622413, záměr |
|