Random mutagenesis as a tool for fine-tuning of affinity and specificity of PA-IIL lectin from Pseudomonas aeruginosa

MRÁZKOVÁ, Jana, Martina POKORNÁ a Michaela WIMMEROVÁ. Random mutagenesis as a tool for fine-tuning of affinity and specificity of PA-IIL lectin from Pseudomonas aeruginosa. In XIII. Setkání biochemiků a molekulárních biologů. 2009. ISBN 978-80-210-4830-0.

Základní údaje

• Originální název: Random mutagenesis as a tool for fine-tuning of affinity and specificity of PA-IIL lectin from Pseudomonas aeruginosa
• Název česky: Náhodná mutageneze jako nástroj pro vylepšení afinity a specifity lektinu PA-IIL z Pseudomonas aeruginosa
• Autoři: MRÁZKOVÁ, Jana (203 Česká republika, domácí), Martina POKORNÁ (203 Česká republika, domácí) a Michaela WIMMEROVÁ (203 Česká republika, garant, domácí).
• Vydání: XIII. Setkání biochemiků a molekulárních biologů, 2009.

Další údaje

• Originální jazyk: angličtina
• Typ výsledku: Konferenční abstrakt
• Obor: 10600 1.6 Biological sciences
• Stát vydavatele: Česká republika
• Utajení: není předmětem státního či obchodního tajemství
• Kód RIV: RIV/00216224:14310/09:00043043
• Organizační jednotka: Přírodovědecká fakulta
• ISBN: 978-80-210-4830-0
• Klíčová slova česky: řízená evoluce; náhodná mutageneze in vitro; lektin PA-IIL; Pseudomonas aeruginosa
• Klíčová slova anglicky: directed evolution; random mutagenesis in vitro; lectin PA-IIL; Pseudomonas aeruginosa

Anotace

Directed evolution is a powerful tool widely used for elucidating the relationship between protein sequence, structure and function and also for producing proteins with altered or improved properties. The most useful approach in directed evolution is a random mutagenesis, which includes a lot of methods used to create diverse mutant libraries. LecB is the target gene we have modified via random mutagenesis, the gene coding PA-IIL lectin. This Pseudomonas aeruginosa soluble protein has been well-characterized. The random mutagenesis could help us to create a protein with interestingly modified specificity and affinity. After several trials we obtained an efficient method which introduces non-silent random mutations into the gene of our interest in sufficient rate. The mutant lectins with improved properties can be used in biotechnology and for bioanalytical purposes.

Anotace česky

Řízená evoluce je účinným nástrojem, široce používaným pro objasňování vztahů mezi proteinovou sekvencí, strukturou a funkcí a také pro produkci proteinů s pozměněnými anebo vylepšenými vlastnostmi. Nejúčinnějším přístupem řízené evoluce je náhodná mutageneze zahrnující velké množství metod, které jsou používány k tvorbě rozsáhlých knihoven mutantů.. Cílovým genem, který byl upravován pomoví náhodné mutageneze, byl gen LecB kódující lektin PA-IIL. Tento rozpustný protein původem z Pseudomonas aeruginosa je velice dobře charakterizován. Náhodná mutageneze by nám měla pomoci vytvořit protein se zajímavě pozměněnou specifitou a afinitou. Po několika pokusech jsme získali efektivní metodu, která je schopná vytvářet v dostatečné míře mutace, které se vždy projeví v aminokyselinové sekvenci. Mutované lektiny s vylepšenými vlastnostmi by mohly být využity v biotechnologii a pro bioanalytické účely.

Návaznosti

• GA303/09/1168, projekt VaV: Název: Lektiny z lidských patogenů - struktura, funkce, inženýrství

Investor: Grantová agentura ČR, Lektidy z lidských patogenů - struktura, funkce, inženýrství

• LC06030, projekt VaV: Název: Biomolekulární centrum

Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Biomolekulární centrum

• MSM0021622413, záměr: Název: Proteiny v metabolismu a při interakci organismů s prostředím

Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Proteiny v metabolismu a při interakci organismů s prostředím