Optimization of capillary electrophoretic method for determination of physiologically relevant nucleotides and coenzymes in cell extract

MUSILOVÁ, Jindra a Zdeněk GLATZ. Optimization of capillary electrophoretic method for determination of physiologically relevant nucleotides and coenzymes in cell extract. In CHEMICA 47S. první. Univerzita Palackého, Olomouc, Česká rep: Univerzita Palackého, Olomouc, Česká rep, 2010, s. 122. ISBN 978-80-244-2470-5.

Základní údaje

• Originální název: Optimization of capillary electrophoretic method for determination of physiologically relevant nucleotides and coenzymes in cell extract
• Název česky: Optimalizace CE metody pro stanovení fyziologicky významných nukleotidů a koenzymů v buněčném extraktu
• Autoři: MUSILOVÁ, Jindra a Zdeněk GLATZ.
• Vydání: první. Univerzita Palackého, Olomouc, Česká rep, CHEMICA 47S, s. 122-122, 2010.
• Nakladatel: Univerzita Palackého, Olomouc, Česká rep

Další údaje

• Originální jazyk: angličtina
• Typ výsledku: Stať ve sborníku
• Obor: 10600 1.6 Biological sciences
• Stát vydavatele: Česká republika
• Utajení: není předmětem státního či obchodního tajemství
• Organizační jednotka: Přírodovědecká fakulta
• ISBN: 978-80-244-2470-5
• ISSN: 0232-0061
• Klíčová slova česky: Nucleotide-Coenzyme-cell extract
• Klíčová slova anglicky: Nukleotid-Koenzym-Buněčný extrakt

Anotace

Due to importance of nucleotides and coenzymes for metabolism, the main aim of this work was to optimize capillary electrophoretic method for the selective and rapid determination of 17 energetically important metabolites (purine and pyrimidine nucleotides, adenine coenzymes and Acetyl CoA). For improvement of concentration sensitivity, the capillary zone electrophoresis (CZE) was combined with the on-line preconcentration technique -field enhanced sample stacking. The optimal separation was reached by using voltage 23 kV (positive polarity)and direct detection at 260, 280 and 340 nm. 50 mM concentration of phosphate buffer (pH 5.8) provided the best resolution of peaks. Resulting method showed RSD in the range from 0.65 to 1.40 % for migration time and from 2.37 to 5.99 % for relative peak area of metabolites (n=10). Optimized method was used for analyzing of cell-extract of bacterium Paracoccus denitrificans.

Anotace česky

Hlavním úkolem této práce bylo optimalizovat CE-metodu pro selektivní a rychlé stanovení 17 energeticky důležitých a pro metabolismus nezbytných metabolitů (purinových a pyrimidinových nukleotidů, adeninových koenzymů a Acetyl CoA). Pro zlepšení koncentrační citlivosti byla využita CZE online prekoncentrační technika-field enhanced stacking. Optimální separace byla provedena při 23 kV (pozitivní polarita)a přímé detekci při 260, 280 a 340 nm. Nejlepšího rozlišení píků bylo dosaženo s 50 mM fosfátovým pufrem, pH 5.8. Výsledná metoda dosahuje RSD v rozmezí 0.65 - 1.45 pro migrační čas a 2.37 - 5.99 pro plochu píku (n=10). Optimalizovaná metoda byla užita k analýze buněčného extraktu bakterie Paracoccus denitrificans.

Návaznosti

• LC06023, projekt VaV: Název: Integrované bioanalytické technologie pro mikroanalýzy a diagnostiku s využitím LIF a hmotnostní spektrometrie

Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Integrované bioanalytické technologie pro mikroanalýzy a diagnostiku s využitím LIF a hmotnostní spektrometrie

• MSM0021622413, záměr: Název: Proteiny v metabolismu a při interakci organismů s prostředím

Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Proteiny v metabolismu a při interakci organismů s prostředím