Studium protein-proteinových interakcí in vivo: Y2H, BiFC, MeRA

HORÁK, Jakub, Vendula HRDINOVÁ a Jan HEJÁTKO. Studium protein-proteinových interakcí in vivo: Y2H, BiFC, MeRA. In 5. Metodické dny. 2009.

Základní údaje

• Originální název: Studium protein-proteinových interakcí in vivo: Y2H, BiFC, MeRA
• Název česky: Studium protein-proteinových interakcí in vivo: Y2H, BiFC, MeRA
• Název anglicky: Studying protein-protein interactions in vivo: Y2H, BiFC, MeRA
• Autoři: HORÁK, Jakub (203 Česká republika, garant), Vendula HRDINOVÁ (203 Česká republika) a Jan HEJÁTKO (203 Česká republika).
• Vydání: 5. Metodické dny, 2009.

Další údaje

• Originální jazyk: čeština
• Typ výsledku: Vyžádané přednášky
• Obor: Genetika a molekulární biologie
• Stát vydavatele: Česká republika
• Utajení: není předmětem státního či obchodního tajemství
• Kód RIV: RIV/00216224:14310/09:00039686
• Organizační jednotka: Přírodovědecká fakulta
• Klíčová slova česky: protein-proteinové interakce; kvasinkový dvouhybridní systém; bimolekulární fluorescenční komplementace; zprostředkovaná vazba na membránu; interakce in vivo; Arabidopsis
• Klíčová slova anglicky: protein-protein interaction; yeast two-hybrid; BiFC; bimolecular fluorescence complementatnion; MeRA; membrane recruitment assay; interactio in vivo; Arabidopsis

Anotace

Schopnost interagovat s dalšími proteiny je jednou ze základních charakteristik proteinů. K rychlému vyhledání interakčních partnerů rostlinných proteinů používáme několik metod pro in vivo analýzu proteinových interakcí v kvasinkách, nebo v transientně transoformovaných listech tabáku Nicotiana benthamiana. Kvasinkový dvouhybridní systém (Yeast two-hybrid system, Y2H) je klasickou metodou pro analýzu proteinových interakcí a je vhodné jej použít pro získání prvních interakčních informací. Výsledky je proto nutné ověřit jinými nezávislými metodami. Jednou z takových metod je bimolekulární fluorescenční komplementace (Bimolecular Fluorescence Complementation, BiFC). Další metodou vhodnou pro analýzu interakcí mezi membránovým proteinem a cytosolikcými proteiny zprostředkované vazby na membránu (Membrane Recruitment Assay, MeRA). Pro konstrukci rekombinantní DNA používáme ve všech třech popsaných případech klonování prostřednictvím Gateway technologie.

Anotace anglicky

One of the fundamental characteristic of protein is the ability to interact with other proteins. Several methods are used to find interaction partners of proteins and study protein-protein interactions in vivo, e.g. in yeast or transiently transformed Nicotiana benthamiana leaves. Yeast two-hybrid assay is classical method used to obtain first information about protein interaction partners. However, it is necessary to verify yeast results by independent methods like bimolecular fluorescence complementation (BiFC) in tobacco leaves. Another method with similar experimental setup is membrane recruitment assay, which is used for studyin interactions between membrane and cytosolic protein. To construct recombinant DNA for all in vivo interaction methods, Gateway technology is used for cloning.

Návaznosti

• LC06034, projekt VaV: Název: Regulace morfogeneze rostlinných buněk a orgánů

Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Regulace morfogeneze rostlinných buněk a orgánů

• MSM0021622415, záměr: Název: Molekulární podstata buněčných a tkáňových regulací

Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Molekulární podstata buněčných a tkáňových regulací