2010
Analysis of the DNA-binding activity of p53 mutants using functional protein microarrays and its relationship to transcriptional activation
MALČÍKOVÁ, Jitka, Boris TICHÝ, Jiří DAMBORSKÝ, Jitka KABÁTHOVÁ, Martin TRBUŠEK et. al.Základní údaje
Originální název
Analysis of the DNA-binding activity of p53 mutants using functional protein microarrays and its relationship to transcriptional activation
Název česky
Studium DNA-vazebné aktivity p53 mutantů pomocí funkčních proteinových čipů a vztah DNA vazby k aktivaci transkripce
Autoři
MALČÍKOVÁ, Jitka (203 Česká republika, domácí), Boris TICHÝ (203 Česká republika, domácí), Jiří DAMBORSKÝ (203 Česká republika, domácí), Jitka KABÁTHOVÁ (203 Česká republika, domácí), Martin TRBUŠEK (203 Česká republika, domácí), Jiří MAYER (203 Česká republika, domácí) a Šárka POSPÍŠILOVÁ (203 Česká republika, garant, domácí)
Vydání
Biological Chemistry, Berlin, DE, Walter de Gruyter&CO, 2010, 1431-6730
Další údaje
Jazyk
angličtina
Typ výsledku
Článek v odborném periodiku
Obor
30200 3.2 Clinical medicine
Stát vydavatele
Česká republika
Utajení
není předmětem státního či obchodního tajemství
Impakt faktor
Impact factor: 3.603
Kód RIV
RIV/00216224:14110/10:00040758
Organizační jednotka
Lékařská fakulta
UT WoS
000275194300009
Klíčová slova anglicky
R337C; real-time PCR; reporter gene assay; transactivation
Příznaky
Mezinárodní význam, Recenzováno
Změněno: 23. 3. 2012 12:40, prof. Mgr. Jiří Damborský, Dr.
V originále
Sequence-specific DNA binding is the key function through which tumor suppressor p53 exerts transactivation of the downstream target genes, often being impaired in cancer cells by mutations in the TP53 gene. Functional protein microarray technology enables a high-throughput parallel analysis of protein properties within one experiment under the same conditions. Using an array approach, we analyzed the DNA binding activity of wild type p53 protein and of 49 variants. Our results show significant differences in the binding properties between the p53 mutants. The C-terminal mutant R337C displayed the highest DNA binding activity on the array. However, the same mutant showed only a partial activation in the reporter gene assay and almost no activation of downstream target genes after transfection of expression vector into cells lacking endogenous p53. These observations demonstrate that DNA binding itself is not sufficient for activating the p53 target genes in at least some of the p53 mutants and, therefore, in vitro studies might not always reflect in vivo conditions.
Česky
Základním předpokladem pro účinnou transaktivaci cílových genů nádorového supresoru p53 je jeho sekvenčně-specifická vazba k DNA, jenž bývá často u nádorových buněk narušena mutacemi v genu TP53. Funkční proteinové čipy umožňují vysokokapacitní analýzu proteinových vlastností paralelně u mnoha vzorků během jediného experimentu za stejných podmínek. Pomocí čipové technologie jsme analyzovali DNA-vazebnou aktivitu wild type p53 a jeho 49 variant. Naše výsledky ukázaly významné rozdíly ve vazebných schopnostech p53 mutantů. C-koncový mutant R337C vykazoval na čipu nejvyšší vazbu k DNA. Po transfekci tohoto mutanta do p53-null buněčných linií jsme však v reportérových genových testech pozorovali pouze částečnou transaktivaci a endogenní cílové geny nebyly aktivovány téměř vůbec. Tyto výsledky ukazují, že alespoň u některých mutantů samotná vazba k DNA není dostatečná pro aktivaci cílových genů a in vitro studie proto ne vždy odráží situaci in vivo.
Návaznosti
| MSM0021622412, záměr |
| ||
| MSM0021622430, záměr |
|