2010
Využití kapilární elektroforézy pro studium enzymů
GLATZ, ZdeněkZákladní údaje
Originální název
Využití kapilární elektroforézy pro studium enzymů
Název česky
Využití kapilární elektroforézy pro studium enzymů
Název anglicky
Application of capillary electrophoresis for study of enzymes
Autoři
Vydání
18. medzinárodná konferencia"Analytické metódy a zdravie človeka" Bratislava 10 - 14.10.2010, 2010
Další údaje
Jazyk
čeština
Typ výsledku
Vyžádané přednášky
Obor
10600 1.6 Biological sciences
Stát vydavatele
Slovensko
Utajení
není předmětem státního či obchodního tajemství
Organizační jednotka
Přírodovědecká fakulta
Klíčová slova česky
kapilární elektroforéza; enzymy; elektroforeticky zprostředkovaná mikroanalýza
Klíčová slova anglicky
capillary electrophoresis; enzymes; EMMA
Změněno: 13. 12. 2010 08:25, prof. RNDr. Zdeněk Glatz, CSc.
V originále
Enzymy, společně s ribozymy, tj. katalyticky aktivními molekulami RNA, jsou biokatalyzátory, které jsou nezbytné pro normální funkci každé prokaryontní i eukaryontní buňky. Jejich vysoká katalytická účinnost a specifita je rovněž předurčuje pro praktické uplatnění v biotechnologických procesech a v celé řadě analytických systémů. Stanovení enzymů tak představuje jednu z nejpoužívanějších procedur nejenom v biochemii a molekulární biologii, ale také v medicíně pro účely klinické diagnostiky, či ve farmacii při vývoji nových léčiv, u kterých je nutné znát jejich metabolismu či vzájemné interakce. Stanovení enzymů je také důležité při studiu jejich funkce a vlastností jako jsou substrátová specifita či reakční kinetika. Bohužel přímé stanovení jejich koncentrace není možné, neboť jsou v buňce přítomny v komplexní směsi s ostatními proteiny, například v již tak jednoduché buňce jako je bakterie Escherichia coli se vyskytuje 3000 proteinů, v lidské buňce je tento počet odhadován na více než 20 000. Jejich stanovení je však možné provádět nepřímo na základě jimi katalyzované reakce, tj. sledovat nárůst produktu reakce či úbytek jejího substrátu. K tomuto účelu je používána celá řada metod – fotometrických, elektrochemických, radiometrických a separačních včetně kapilární elektroforézy (CE). Ta zde přitom přináší celou řadu výhod, jako jsou rychlost analýzy, vysoká separační účinnost a malé množství vzorku. Stanovení aktivity enzymů pomocí CE lze provádět dvěma hlavními způsoby. Při klasickém stanovení probíhá enzymová reakce v reakční nádobce a CE je využita pouze pro separaci substrátu(ů) a produktu(ů) enzymové reakce. Druhou možností je metoda elektroforeticky zprostředkované mikroanalýzy – Electrophoretically Mediated Microanalysis (EMMA), kde kapilára slouží nejenom jako separační médium, ale také jako reakční prostředí pro enzymovou reakci. V přednášce bude na příkladech několika enzymových reakcí dokumentováno uplatnění obou těchto přístupů, hlavní pozornost pak bude věnována metodě EMMA, která kromě klasických výhod CE přináší také možnost plné automatizace příslušného stanovení.
Anglicky
Enzymes are biological catalysts that play an important role in biochemical reactions necessary for normal growth, maturation and reproduction through whole live world. Their accurate quantitation in biological samples is important in many fields of biochemistry, not only in routine biochemistry and in fundamental research, but also in clinical and pharmacological research and diagnosis. Since the direct measurement of enzymes by masses is impossible, they must be quantified by their catalytic activities. Many different methods have been applied for this purpose so far. Although photometric methods are undoubtedly the most frequently used, separation methods will further gain their position in this field. The lecture reviews different possibilities for the assay of enzymatic activity by means of capillary electrophoresis (CE). Both the off-line and on-line enzyme assays based on CE are discussed.
Návaznosti
| GAP206/10/0057, projekt VaV |
| ||
| LC06023, projekt VaV |
| ||
| MSM0021622413, záměr |
|