Identifikace nových vazebných partnerů pro onkoprotein Mdm2 a
jejich vliv na regulaci Mdm2 a p53 v nádorových buňkách

a 2010

Identifikace nových vazebných partnerů pro onkoprotein Mdm2 a jejich vliv na regulaci Mdm2 a p53 v nádorových buňkách

CETKOVSKÁ, Kateřina, Karen VOUSDEN a Stjepan ULDRIJAN

Základní údaje

Originální název

Identifikace nových vazebných partnerů pro onkoprotein Mdm2 a jejich vliv na regulaci Mdm2 a p53 v nádorových buňkách

Název anglicky

Identification of novel binding partners for oncoprotein Mdm2 and their influence on the regulation of Mdm2 and p53 in cancer cells

Autoři

CETKOVSKÁ, Kateřina, Karen VOUSDEN a Stjepan ULDRIJAN

Vydání

X. MEZIOBOROVÉ SETKÁNÍ MLADÝCH BIOLOGŮ, BIOCHEMIKŮ A CHEMIKŮ pořádané firmou Sigma-Aldrich, 25.5. – 28.5. 2010, Devět skal – Žďárské vrchy, 2010

Další údaje

Jazyk

čeština

Typ výsledku

Konferenční abstrakt

Obor

30200 3.2 Clinical medicine

Stát vydavatele

Česká republika

Utajení

není předmětem státního či obchodního tajemství

Impakt faktor

Impact factor: 0.620

Organizační jednotka

Lékařská fakulta

ISSN

Změněno: 20. 1. 2011 12:58, Mgr. Stjepan Uldrijan, CSc.

Anotace

V originále

Protein p53 je významným nádorovým supresorem a jeho funkce je nějakým způsobem narušena u většiny nádorů, zejména mutacemi v genu pro p53. Nicméně u nemalé části nádorů, které mají gen pro p53 neporušený, je funkce proteinu vyřazena kvůli nadměrné expresi jeho negativního regulátoru, onkoproteinu Mdm21. Mdm2 slouží jako E3 ubikvitin ligasa a předurčuje p53 a své ostatní substráty, včetně sebe sama, k degradaci v proteasomu 26S. Mechanismy regulující aktivitu proteinu Mdm2 v nádorových buňkách nejsou zatím zcela jasné. Za účelem identifikace nových interakčních partnerů a potenciálních regulátorů proteinu Mdm2 jsme provedli tandemovou afinitní purifikaci buněčných komplexů obsahujících centrální část proteinu Mdm2 z několika lidských buněčných linií. Tyto proteinové komplexy pak byly dále analyzovány hmotnostní spektrometrií. Identifikovali jsme dva nové potenciální regulátory Mdm2 – bazální transkripční faktor GTF2I a protein USP48, který patří do rodiny ubikvitin-terminálních karboxyl-hydrolas a jehož funkce zatím není známa. Interakci těchto proteinů s Mdm2 jsme potvrdili pomocí imunoprecipitace a imunofluorescenčních relokalizačních experimentů. Z ubikvitylačních experimentů vyplývá, že protein GTF2I silně zvyšuje hladinu ubikvitylace p53 a mohl by tak být negativním regulátorem p53. GTF2I se mimo jiné podílí na aktivaci transkripce cílových genů při narušení funkce endoplazmatického retikula (ER)2. Pomocí luciferázového reportérového konstruktu se nám podařilo zjistit, že Mdm2 snižuje transkripční aktivitu GTF2I, což naznačuje, že protein Mdm2 může zasáhnout do buněčné odpovědi na poruchu funkce ER. Přítomnost USP-domény u dalšího identifikovaného interakčního partnera USP48 naznačuje, že tento protein bude sloužit jako deubikvitylační enzym a stabilizovat tak již ubikvitylované substráty3. Naše výsledky ukazují, že USP48 opravdu stabilizuje Mdm2. V přítomnosti USP48 je však autoubikvitylace Mdm2 zesílena, což ukazuje, že USP48 reguluje stabilitu Mdm2 jiným, složitějším mechanismem, než jeho deubikvitylací.

Návaznosti

GA301/09/1324, projekt VaV

Název: Funkce centrální domény onkoproteinu Mdm2 a jejích nových vazebných partnerů při regulaci nádorového supresoru p53

Investor: Grantová agentura ČR, Funkce centrální domény onkoproteinu Mdm2 a jejich nových vazebných partnerů při regulaci nádorového supresoru p53

Citovat

CETKOVSKÁ, Kateřina, Karen VOUSDEN a Stjepan ULDRIJAN. Identifikace nových vazebných partnerů pro onkoprotein Mdm2 a jejich vliv na regulaci Mdm2 a p53 v nádorových buňkách. In X. MEZIOBOROVÉ SETKÁNÍ MLADÝCH BIOLOGŮ, BIOCHEMIKŮ A CHEMIKŮ pořádané firmou Sigma-Aldrich, 25.5. – 28.5. 2010, Devět skal – Žďárské vrchy. 2010. ISSN 1213-7103.

@proceedings{921570,
   author = {Cetkovská, Kateřina and Vousden, Karen and Uldrijan, Stjepan},
   booktitle = {X. MEZIOBOROVÉ SETKÁNÍ MLADÝCH BIOLOGŮ, BIOCHEMIKŮ A CHEMIKŮ pořádané firmou Sigma-Aldrich, 25.5. – 28.5. 2010, Devět skal – Žďárské vrchy},
   language = {cze},
   title = {Identifikace nových vazebných partnerů pro onkoprotein Mdm2 a jejich vliv na regulaci Mdm2 a p53 v nádorových buňkách},
   year = {2010}
}

TY  - CONF
ID  - 921570
AU  - Cetkovská, Kateřina - Vousden, Karen - Uldrijan, Stjepan
PY  - 2010
TI  - Identifikace nových vazebných partnerů pro onkoprotein Mdm2 a jejich vliv na regulaci Mdm2 a p53 v nádorových buňkách
N2  - Protein p53 je významným nádorovým supresorem a jeho funkce je nějakým způsobem narušena u většiny nádorů, zejména mutacemi v genu pro p53. Nicméně u nemalé části nádorů, které mají gen pro p53 neporušený, je funkce proteinu vyřazena kvůli nadměrné expresi jeho negativního regulátoru, onkoproteinu Mdm21. Mdm2 slouží jako E3 ubikvitin ligasa a předurčuje p53 a své ostatní substráty, včetně sebe sama, k degradaci v proteasomu 26S. Mechanismy regulující aktivitu proteinu Mdm2 v nádorových buňkách nejsou zatím zcela jasné. Za účelem identifikace nových interakčních partnerů a potenciálních regulátorů proteinu Mdm2 jsme provedli tandemovou afinitní purifikaci buněčných komplexů obsahujících centrální část proteinu Mdm2 z několika lidských buněčných linií. Tyto proteinové komplexy pak byly dále analyzovány hmotnostní spektrometrií. Identifikovali jsme dva nové potenciální regulátory Mdm2 – bazální transkripční faktor GTF2I a protein USP48, který patří do rodiny ubikvitin-terminálních karboxyl-hydrolas a jehož funkce zatím není známa. Interakci těchto proteinů s Mdm2 jsme potvrdili pomocí imunoprecipitace a imunofluorescenčních relokalizačních experimentů. Z ubikvitylačních experimentů vyplývá, že protein GTF2I silně zvyšuje hladinu ubikvitylace p53 a mohl by tak být negativním regulátorem p53. GTF2I se mimo jiné podílí na aktivaci transkripce cílových genů při narušení funkce endoplazmatického retikula (ER)2. Pomocí luciferázového reportérového konstruktu se nám podařilo zjistit, že Mdm2 snižuje transkripční aktivitu GTF2I, což naznačuje, že protein Mdm2 může zasáhnout do buněčné odpovědi na poruchu funkce ER. Přítomnost USP-domény u dalšího identifikovaného interakčního partnera USP48 naznačuje, že tento protein bude sloužit jako deubikvitylační enzym a stabilizovat tak již ubikvitylované substráty3. Naše výsledky ukazují, že USP48 opravdu stabilizuje Mdm2. V přítomnosti USP48 je však autoubikvitylace Mdm2 zesílena, což ukazuje, že USP48 reguluje stabilitu Mdm2 jiným, složitějším mechanismem, než jeho deubikvitylací.
ER  -

CETKOVSKÁ, Kateřina, Karen VOUSDEN a Stjepan ULDRIJAN. Identifikace nových vazebných partnerů pro onkoprotein Mdm2 a jejich vliv na regulaci Mdm2 a p53 v nádorových buňkách. In \textit{X. MEZIOBOROVÉ SETKÁNÍ MLADÝCH BIOLOGŮ, BIOCHEMIKŮ A CHEMIKŮ pořádané firmou Sigma-Aldrich, 25.5. – 28.5. 2010, Devět skal – Žďárské vrchy}. 2010. ISSN~1213-7103.

Podrobný výpis o publikaci