Proteom seminální plazmy u mužů s azoospermií

CRHA, Igor, Hana KONEČNÁ, Jana ŽÁKOVÁ, Jana BURŠÍKOVÁ, Zbyněk ZDRÁHAL, E. LOUSOVÁ, Pavel VENTRUBA a Michal POHANKA. Proteom seminální plazmy u mužů s azoospermií. Praktická gynekologie. 2011, roč. 15, č. 2, s. 60-63. ISSN 1211-6645.

Základní údaje

• Originální název: Proteom seminální plazmy u mužů s azoospermií
• Název anglicky: Seminal plasma proteome in men with azoospermia
• Autoři: CRHA, Igor (203 Česká republika, garant, domácí), Hana KONEČNÁ (203 Česká republika), Jana ŽÁKOVÁ (203 Česká republika, domácí), Jana BURŠÍKOVÁ (203 Česká republika), Zbyněk ZDRÁHAL (203 Česká republika), E. LOUSOVÁ (203 Česká republika), Pavel VENTRUBA (203 Česká republika, domácí) a Michal POHANKA (203 Česká republika, domácí).
• Vydání: Praktická gynekologie, 2011, 1211-6645.

Další údaje

• Originální jazyk: čeština
• Typ výsledku: Článek v odborném periodiku
• Obor: 30214 Obstetrics and gynaecology
• Stát vydavatele: Česká republika
• Utajení: není předmětem státního či obchodního tajemství
• Kód RIV: RIV/00216224:14110/11:00052606
• Organizační jednotka: Lékařská fakulta
• Klíčová slova česky: proteom; neplodnost; azoospermie; oxidační stress
• Klíčová slova anglicky: proteome; male infertility; azoospermia; oxidative stress
• Příznaky: Recenzováno

Anotace

Cíl: Seminální plazma obsahuje proteiny, které jsou důležitými markery patologií reprodukčního ústrojí. Cílem práce je analyzovat rozdíly detekované v proteomu seminální plazmy mužů s azoospermií a dárců spermatu. Materiál a metodika: Vzorky seminální plazmy byly získány standardním postupem od mužů s azoospermií a dárců spermatu a zamrazeny v kapalném dusíku. Proteiny ve vzorcích byly solubilizovány lyzačním pufrem obsahujícím detergent CHAPS. Výsledné proteinové izoláty byly separovány dvourozměrnou gelovou elektroforézou (2-DE). V prvním rozměru byl pro izoelektrickou fokusaci použit imobilizovaný gradient pH 3–10 NL, pro dělení v druhém rozměru 12 % SDS-PAGE. Proteiny v gelu byly barveny fluorescenčním barvivem Sypro Ruby. Kvalitativní a kvantitativní rozdíly mezi jednotlivými vzorky byly vyhodnoceny pomocí programu PDQuest. Proteiny ve vybraných spotech vykazující rozdíly byly následně štěpeny trypsinem a identifikovány pomocí MALDI-MS/MS (resp. LC-MS/MS) a vyhodnocovacího programu Mascot. Výsledky: Vyšetření byla provedena na vzorcích od 6 dárců spermatu a 6 mužů s azoospermií. V proteomu dárců spermatu s normospermií byly nalezeny minimální rozdíly, mezi dárci spermatu a skupinou pacientů s azoospermií byly zjištěny četné kvalitativní a kvantitativní rozdíly. Na základě výsledků analýzy obrazu bylo pomocí hmotnostní spektrometrie identifikováno 18 kvalitativně odlišných proteinů. Závěr: Bylo nalezeno 18 kandidátních proteinů, které mohou být potenciálními biomarkery azoospermie. Komparativní proteomika je perspektivním nástrojem výzkumu poruch plodnosti a oxidačního stresu.

Anotace anglicky

Objective: Seminal plasma is a potential source of biomarkers of many disorders of male reproductive organs. Identification and characterization of individual proteins in seminal plasma could be a useful tool for estimating male infertility. The aim of the study was to analyze proteome differences in men with azoospermia and normospermia. Material and methods: Samples of seminal plasma from men with azoospermia and normospermia were collected and cryopreserved in liquid nitrogen. Detergent CHAPS was used to solubilize the sample proteins. Two dimensional (2-D) gel electrophoresis was used to separate protein isolates. Immobilized gradient pH 3–10 NL was used for isoelectric focusation and 12% SDS-PAGE was used for second dimension. Sypro Ruby dye was used to stain the proteins. Software PDQuest was used to analyze quantitative and qualitative differences. Selected proteins were digested by trypsin and identified by MALDI-MS/MS or LC-MS/MS and (using) the Mascot software. Results: Six azoospermia and six normospermia samples were analyzed. Minimal differences in proteomic profile were found among normospermia samples. Significant quantitative and qualitative differences were detected between men with normospermia and azoospermia. Image analysis and mass spectrometry identified eighteen different proteins. Conclusion: Eighteen proteins were found that could serve as potential markers of azoospermia. These results provide an important basis for comparative proteomics of infertility and oxidative stress.

Návaznosti

• MSM0021622415, záměr: Název: Molekulární podstata buněčných a tkáňových regulací

Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Molekulární podstata buněčných a tkáňových regulací

• NS9661, projekt VaV: Název: Vliv metabolismu homocysteinu na poruchy plodnosti.

Investor: Ministerstvo zdravotnictví ČR, Vliv metabolismu homocysteinu na poruchy plodnosti