2012
Utilization of In-capillary Nanoreactor: Inhibition Study of Cytochrome P450 2C9 Isoform Reaction with Diclofenac and Sulfaphenazole by Means of Capillary Electrophoresis
ŘEMÍNEK, Roman; Marta ZEISBERGEROVÁ a Zdeněk GLATZZákladní údaje
Originální název
Utilization of In-capillary Nanoreactor: Inhibition Study of Cytochrome P450 2C9 Isoform Reaction with Diclofenac and Sulfaphenazole by Means of Capillary Electrophoresis
Název česky
Využití kapilárního nanoreaktoru: Inhibiční studie cytochromu P450 2C9 s diklofenakem a sulfafenazolem pomocí kapilární elektroforézy
Autoři
ŘEMÍNEK, Roman; Marta ZEISBERGEROVÁ a Zdeněk GLATZ
Vydání
Final Program 27th International Symposium on Microscale Bioseparations and Analyses MSB 2012 Geneva, 2012
Další údaje
Jazyk
angličtina
Typ výsledku
Konferenční abstrakt
Obor
10600 1.6 Biological sciences
Stát vydavatele
Česká republika
Utajení
není předmětem státního či obchodního tajemství
Označené pro přenos do RIV
Ne
Organizační jednotka
Přírodovědecká fakulta
Klíčová slova česky
on-line kapilární elektroforéza, diklofenak, sulfaphenazol, cytochrom P450 2C9, metabolismus léčiv
Klíčová slova anglicky
in-capillary reaction, on-line capillary eletrophoresis, cytochrome P450, diclofenac, sulfaphenazole, drug metabolism
Příznaky
Mezinárodní význam, Recenzováno
Změněno: 21. 2. 2012 12:00, Ing. Mgr. Roman Řemínek, Ph.D.
V originále
A new methodology for creation of nanoscale bioreactor inside the separation capillary in capillary electrophoresis was developed. In principle, solutions of reactants are injected by relatively low pressure as a series of consecutive narrow plugs with slightly parabolic profiles due to laminar nature of the hydrodynamic flow inside the capillary. Reaction mixture is then mixed by combination of longitudinal and transverse diffusion within minute period. This procedure provides homogenous reaction mixture with easily changeable composition. Kinetic and inhibition studies of cytochrome P450 2C9 (CYP2C9) reaction with diclofenac as a probe substrate and sulfaphenazole as a probe inhibitor were performed in order to prove the applicability of proposed methodology for on-line screenings of CYP2C9 inhibitors in early stages of a new drug development. As a result apparent Michaelis constant of 2.66 +- 0.18 uM, apparent maximum reaction velocity of 7.91 +- 0.22 nmol/min/nmol, Hill coefficient of 1.59 +- 0.16, 50 % inhibitory concentration of 0.94 +- 0.04 uM and apparent inhibition constant of 0.39 +- 0.07 uM were determined. All these values are in agreement with literature data obtained by different techniques. What is more, developed methodology enables reduction of CYP2C9 solution consumption to 0.6 nl per analysis.
Česky
Byla vypracována nová metodologie pro míchání jednotlivých reaktantů uvnitř kapilárního nanoreaktoru. Aplikační možnosti zavedeného přístupu byly demonstrovány pomocí inhibiční studie cytochromu P450 2C9 s modelovým substrátem diklofenakem a modelovým inhibitorem sulfafenazolem. Stanovené zdánlivé hodnoty Michaelisovy konstanty, Hillova koeficientu, IC50 a inhibiční konstanty odpovídaly hodnotám těchto parametrů uvedených v literatuře.
Návaznosti
| GAP206/10/0057, projekt VaV |
|