Diplomová práce

Elektrochemické ELISA metody

Electrochemical Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Methods

Bc. Daniel Dobrovodský
Anotace

Tato diplomová práce se věnuje vývoji elektrochemické ELISA (z angl. Enzyme-linked immunosorbent assay) metody stanovení nádorového supresoru proteinu p53 využitím mikroskopických magnetických částic a voltametrické detekce na tištěných uhlíkových elektrodách (SPCE). Protein p53 je klíčový v prevenci rakoviny. Jeho mutované formy, nalézající se téměř u 50-ti % všech lidských typů nádorů, mohou být …více

Abstract

This thesis concerns with development of an electrochemical enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for determination of tumour suppressor protein p53 based on microscopic magnetic beads (MB) and voltammetric detection at screenprinted carbon electrodes (SPCE). Protein p53 is crucial in cancer prevention. Its mutated forms, found in almost 50% of human tumour types, can be used as diagnostic markers …více

Zadání práce
Detekce biologických a chemických kontaminantů, patogenů a jiných důležitých analytů hraje důležitou roli v diagnostice onemocnění a v prevenci rozšiřování nemocí a infekcí. K těmto účelům mohou být využity ELISA metody (z angl. Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay), které díky dostupným protilátkám mohou specificky detekovat potenciálně téměř jakoukoliv molekulu s vysokou citlivostí. Té je možno dosáhnout díky spřažené enzymatické amplifikaci detekovaných produktů enzymatické přeměny zvolených substrátů. Díky flexibilitě využitelných ELISA systémů je tato metoda v dnešní době preferovaná a hojně rozšířená pro detekci antigenů i protilátek v biologii, biochemii, medicíně i potravinářském průmyslu. Dnes nejběžnější ELISA metody využívají ke své kvantifikaci spektrofotometrickou detekci za využití 96-ti jamkových destiček zajišťující vysokou produktivitu práce a výhodu možnosti detekce mnoha sledovaných analytů. Mnohem výhodnější však může být zapojení levnějších a efektivnějších elektrochemických metod, které umožňují miniaturizovat celé ELISA systémy, minimalizovat nároky na objemy vzorků a zvyšovat jejich citlivost. [1] Cílem této diplomové práce bude optimalizovat vybraný ELISA systém detekce interakce proteinu p53 s vybranými protilátkami pomocí voltametrických metod využívající uhlíkové elektrody. K imobilizaci protilátek budou využity různé druhy substrátů (magnetické kuličky či 96-ti jamkové polystyrénové destičky). K citlivé voltametrické detekci produktů enzymatické přeměny vybraných substrátů pak budou použity elektrody z pyrolytického grafitu či sítotiskové uhlíkové elektrody. Dosažené výsledky této práce mohou v budoucnu sloužit jako praktický základ pro vývoj citlivých a vysoce specifických metod elektrochemické detekce interakcí biomakromolekul (antigeny, protilátky, proteiny, DNA, RNA). Získané informace mohou být pak použity při vývoji biochemických, biologických či medicínských aplikací. Příslušná odborná literatura bude doporučena školitelem při osobní konzultaci. [1] F. Ricci, G. Adornetto, G. Palleschi, A review of experimental aspects of electrochemical immunosensors, Electrochim. Acta. (2012). doi:10.1016/j.electacta.2012.06.033.
Práce zkontrolována:
16. 5. 2018 12:15, RNDr. Aleš Daňhel, Ph.D.
Plný text práce
3,8 MB / soubor PDF
Jazyk práce
angličtina angličtina
Termín obhajoby
22. 6. 2018
Práce byla úspěšně obhájena

Vedoucí

RNDr. Aleš Daňhel, Ph.D.
SIBP CSB CEITEC MU

Oponent

doc. RNDr. Vlastimil Vyskočil, Ph.D.
Přírodovědecká fakulta, Univerzita Karlova

Konzultant

Mgr. Petr Orság, Ph.D., učo 21288
abs PřF MU

 
Název
Vložil
Vloženo
Práva
  • Přidání souboru

    Soubor nebo složku lze nahrát pomocí tlačítka Přidat.
  • Další operace se soubory

    Podrobnosti lze zjistit označením příslušného řádku.
  • Pohled pro experty

    Pro častou práci je možné zvolit režim Více možností.
  • Vyhledávání souborů

    Vyhledávaný výraz můžete zadat přímo do adresního řádku.
  • Rychlý přístup k souborům

    Pomocí funkce Nedávné je možné se rychle vrátit k právě prohlíženým souborům. Oblíbené soubory je také možné označit Hvězdičkou.