Diplomová práce

Imunochemická stanovení s použitím fluorescenčních nanočástic

Immunochemical assays based on fluorescent nanoparticles

Bc. Patrik Gereg
Anotace

Diplomová práce studuje imunochemické stanovení lidského sérového albuminu (HSA) s fluorescenční detekcí. Imunostanovení se realizovalo jako „sendvičové“ fluoroimunostanovení (FIA) na mikrotitrační desce upravené pro vysokou adsorpci proteinů. Jako fluorescenční značka navázaná na detekční protilátce se použil jednak tradiční organický fluorofor (fluorescein), jednak novodobé up-konvertující nanočástice …více

Abstract

This diploma thesis studies immunochemical assay with fluorescent detection of human serum albumin (HSA). The immunoassay was made as ‘sandwich‘ fluoroimmunoassay on microtiter plate with surface treated for high protein affinity. Either traditional organic fluorophore (fluorescein) or up-to-date up-converting nanoparticles (UCNPs) were used as fluorescent label bound to the detection antibody. FIA …více

Zadání práce
Na modelovém stanovení albuminu v moči pomocí monoklonální protilátky budou porovnány bioanalytické parametry dosažitelné s různými typy fluorescenčních značek. Budou připraveny biokonjugáty využívající kvantové tečky (QD), lanthanidové up-konvertující nanočástice (UCNP) a pro srovnání i klasický fluorofor (fluorescein, tetramethylrhodamin). Po purifikaci biokonjugátů a charakterizaci jejich fluorescečních vlastností budou studovány jejich afinitní interakce při tvorbě imunokomplexu pomocí povrchové plasmonové resonance (SPR, Biacore nebo BioNavis). FRET varianta (Forsterův rezonanční přenos energie mezi blízkými fluorofory, z nichž jeden funguje jako donor, jehož emisní pás se překrývá s absorbčním pásem akceptorového fluoroforu) poslouží k otestování homogenního imunostanovení; výsledkem je zde změna barevného rozložení emitovaného záření - po přiblížení v imunokomplexu přestává emitovat donor a místo něj emituje akceptor. Nakonec budou vyvinuta fluorescenční imunostanovení (FIA) v mikrodestičkovém formátu s vyhodnocením na systému Synergy a otestována pro měření mikroalbuminurie. Nejcitlivější varianta pak bude pokusně převedena i do formátu jednorázového papírkového stanovení (lateral flow strip immunoassay).
Práce zkontrolována:
17. 5. 2018 13:10, prof. RNDr. Petr Skládal, CSc., učo 2202
Plný text práce
2,4 MB / soubor PDF
Jazyk práce
slovenština slovenština
Termín obhajoby
6. 6. 2018
Práce byla úspěšně obhájena

Vedoucí

prof. RNDr. Petr Skládal, CSc., učo 2202
ÚBioch Chem PřF MU

Oponent

doc. Mgr. Zdeněk Farka, Ph.D., učo 357740
NABI CSB CEITEC MU

  • Přidání souboru

    Soubor nebo složku lze nahrát pomocí tlačítka Přidat.
  • Další operace se soubory

    Podrobnosti lze zjistit označením příslušného řádku.
  • Pohled pro experty

    Pro častou práci je možné zvolit režim Více možností.
  • Vyhledávání souborů

    Vyhledávaný výraz můžete zadat přímo do adresního řádku.
  • Rychlý přístup k souborům

    Pomocí funkce Nedávné je možné se rychle vrátit k právě prohlíženým souborům. Oblíbené soubory je také možné označit Hvězdičkou.