Bakalářská práce

Využití magnetických částic pro prekoncentraci analytu v imunochemických stanoveních

Use of magnetic particles for analyte preconcentration in immunochemical assays

Zora Kuruczová
Anotace

Tato bakalářská práce se zabývá využitím magnetických mikročástic jako imobilizačního povrchu pro imunochemická stanovení. Jsou porovnány parametry konvenčního enzymového imunostanovení typu ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) se stanovením ULISA (upconversion-linked immunosorbent assay) využívajícím foton-upkonverzní nanočástice jako značky. S využitím magnetických mikročástic je možné dosáhnout …více

Abstract

This bachelor thesis examines the use of magnetic microparticles as an immobilization surface for immunochemical assays. The parameters of a conventional enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) are compared with an upconversion-linked immunosorbent assay (ULISA) assay using photon-upconversion nanoparticles as labels. With the use of magnetic microparticles, it is possible to achieve preconcentration …více

Zadání práce

Díky vysoké specificitě protilátek jsou imunochemická stanovení jednou z nejrozšířenějších metod v klinické diagnostice. Stanovení typu ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) je prováděno v mikrotitračních destičkách a využívá konjugátů protilátek s enzymy (typicky křenovou peroxidázou) pro analýzu založenou na měření absorbance produktu enzymové reakce. Jednou z možností zvýšení citlivosti detekce je nahrazení enzymových značek různými druhy nanočástic, které jsou detekovány typicky na základě jejich luminiscence nebo katalytické aktivity. Alternativně je možné nahradit mikrotitrační destičku jiným podkladem, např. magnetickými mikročásticemi, které po konjugaci s protilátkou umožňují prekoncentraci analytu. Detekční krok po magnetické separaci pak může být založen na enzymech i nanočásticích.

Cílem této práce bude vyvinout metodiku pro imunochemické stanovení s využitím magnetických mikročástic. Komerčně dostupné magnetické mikročástice budou konjugovány s modelovou protilátku (např. specifickou k lidskému sérovému albuminu, markeru diabetického poškození ledvin). Následně bude druhá protilátka konjugována s křenovou peroxidázou a bude vyvinuto sendvičové imunostanovení. Jeho parametry budou srovnány s konvenční metodou ELISA založenou na stejné značce, hlavním cílem bude dosáhnout vyšší citlivosti v případě magnetické separace. Optimalizovaná metoda bude nakonec využita pro analýzu komplexních vzorků, např. pro detekci lidského sérového albuminu v moči. Volitelně pak bude magnetické imunostanovení provedeno se značkou založenou na luminiscenčních foton-upkonverzních nanočásticích, což povede k dalšímu zvýšení citlivosti.

Práce zkontrolována:
19. 5. 2022 13:43, doc. Mgr. Zdeněk Farka, Ph.D., učo 357740
Plný text práce
1,9 MB / soubor PDF
Jazyk práce
slovenština slovenština
Termín obhajoby
17. 6. 2022
Práce byla úspěšně obhájena

Vedoucí

doc. Mgr. Zdeněk Farka, Ph.D., učo 357740
ÚBioch Chem PřF MU

Oponent

Mgr. Radka Obořilová, Ph.D., učo 211956
Nanobio CSB CEITEC MU

Literatura

  • PASTUCHA, Matěj; Zdeněk FARKA; Karel LACINA; Zuzana MIKUŠOVÁ a Petr SKLÁDAL. Magnetic nanoparticles for smart electrochemical immunoassays: a review on recent developments. Microchimica Acta. Vienna: Springer, 2019, roč. 186, č. 5, s. 1-26. ISSN 0026-3672. Dostupné z: https://doi.org/10.1007/s00604-019-3410-0.
  • FARKA, Zdeněk; Matthias Jürgen MICKERT; Matěj PASTUCHA; Zuzana MIKUŠOVÁ; Petr SKLÁDAL a Hans-Heiner GORRIS. Advances in Optical Single-Molecule Detection: En Route to Supersensitive Bioaffinity Assays. Angewandte Chemie International Edition. Weinheim: Wiley-VCH, 2020, roč. 59, č. 27, s. 10746-10773. ISSN 1433-7851. Dostupné z: https://doi.org/10.1002/anie.201913924.

  • Přidání souboru

    Soubor nebo složku lze nahrát pomocí tlačítka Přidat.
  • Další operace se soubory

    Podrobnosti lze zjistit označením příslušného řádku.
  • Pohled pro experty

    Pro častou práci je možné zvolit režim Více možností.
  • Vyhledávání souborů

    Vyhledávaný výraz můžete zadat přímo do adresního řádku.
  • Rychlý přístup k souborům

    Pomocí funkce Nedávné je možné se rychle vrátit k právě prohlíženým souborům. Oblíbené soubory je také možné označit Hvězdičkou.