Bakalářská práce

Detekce včelích patogenů pomocí imunoanalytických metod

Detection of honeybee pathogens using immunoanalytical methods

Dorota Sklenárová
Anotace

Tato bakalářská práce se zabývá imunochemickým stanovením včelích patogenů Melissococcus plutonius (původce hniloby včelího plodu) a Paenibacillus larvae (původce moru včelího plodu). Byly připraveny konjugáty protilátek s biotinem a křenovou peroxidázou, ověření jejich funkčnosti proběhlo pomocí enzymového imunostanovení (ELISA). Pro zlepšení parametrů imunostanovení bylo enzymové značení následně …více

Abstract

This bachelor thesis examines immunochemical detection of honeybee pathogens Melisococcus plutonius and Paenibacillus larvae, which are responsible for European and American foulbrood, respectively. Conjugates of specific antibodies with biotin and horseradish peroxidase were prepared and tested in enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Afterwards, the assay parameters were improved by replacing …více

Zadání práce

Včela medonosná je nejvýznamnějším hmyzím opylovačem, a je tak důležitá jak pro zemědělství, tak pro udržení biodiverzity. Včely jsou v současnosti ohrožovány chorobami různého původu; z bakteriálních chorob jsou nejpodstatnější mor včelího plodu (způsobený bakterií Paenibacillus larvae) a hniloba včelího plodu (bakterie Melissococcus plutonius). Pro minimalizaci rizika šíření těchto infekcí je nutné mít k dispozici spolehlivé metody pro rychlou diagnostiku nakažených kolonií. V současné době používané metody však mají řadu nevýhod, jako je dlouhá doba analýzy nebo nízká citlivost.

Cílem této práce bude využít imunoanalytické metody k detekci původců moru a hniloby včelího plodu. Nejprve budou nakultivovány obě bakterie (P. larvae a M. plutonius). Následně budou připraveny konjugáty protilátek s křenovou peroxidázou pro enzymové imunostanovení (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA). Parametry stanovení budou dále zlepšeny nahrazením enzymové značky foton-upkonverzními nanočásticemi (UCNPs). V poslední fázi budou optimalizované metody ověřeny na analýze reálných vzorků včel, larev a měli.

Cíle práce:

  • Kultivace bakterií P. larvae a M. plutonius.
  • Příprava konjugátů protilátek s křenovou peroxidázou a vývoj ELISA stanovení.
  • Vývoj imunostanovení s využitím značek na bázi UCNPs.
  • Ověření optimalizovaných metod na analýze reálných vzorků.
Práce zkontrolována:
1. 6. 2021 10:15, doc. Mgr. Zdeněk Farka, Ph.D., učo 357740
Plný text práce
7 MB / soubor PDF
Jazyk práce
slovenština slovenština
Termín obhajoby
7. 7. 2021
Práce byla úspěšně obhájena

Vedoucí

doc. Mgr. Zdeněk Farka, Ph.D., učo 357740
ÚBioch Chem PřF MU

Oponent

Mgr. Radka Obořilová, Ph.D., učo 211956
Nanobio CSB CEITEC MU

Konzultant

Mgr. Matěj Pastucha, Ph.D., učo 356629
Fluor ChemNas RECETOX PřF MU

Literatura

  • POLÁCHOVÁ, Veronika; Matěj PASTUCHA; Zuzana MIKUŠOVÁ; Matthias Jürgen MICKERT; Antonín HLAVÁČEK; Hans-Heiner GORRIS; Petr SKLÁDAL a Zdeněk FARKA. Click-conjugated photon-upconversion nanoparticles in an immunoassay for honeybee pathogen Melissococcus plutonius. Nanoscale. Cambridge: Royal Society of Chemistry, 2019, roč. 11, č. 17, s. 8343-8351. ISSN 2040-3364. Dostupné z: https://doi.org/10.1039/C9NR01246J.
  • MIKUŠOVÁ, Zuzana; Zdeněk FARKA; Matěj PASTUCHA; Veronika POLÁCHOVÁ; Radka OBOŘILOVÁ a Petr SKLÁDAL. Amperometric Immunosensor for Rapid Detection of Honeybee Pathogen Melissococcus Plutonius. Electroanalysis. WEINHEIM: WILEY-VCH Verlag GmbH, 2019, roč. 31, č. 10, s. 1969-1976. ISSN 1040-0397. Dostupné z: https://doi.org/10.1002/elan.201900252.
  • KOSTIV, Uliana; Zdeněk FARKA; Matthias Jürgen MICKERT; Hans-Heiner GORRIS; Nadiia VELYCHKIVSKA; Ognen POP-GEORGIEVSKI; Matěj PASTUCHA; Eliška ODSTRČILÍKOVÁ; Petr SKLÁDAL a Daniel HORÁK. Versatile Bioconjugation Strategies of PEG-Modified Upconversion Nanoparticles for Bioanalytical Applications. Biomacromolecules. Washington, DC: American Chemical Society, 2020, roč. 21, č. 11, s. 4502-4513. ISSN 1525-7797. Dostupné z: https://doi.org/10.1021/acs.biomac.0c00459.

  • Přidání souboru

    Soubor nebo složku lze nahrát pomocí tlačítka Přidat.
  • Další operace se soubory

    Podrobnosti lze zjistit označením příslušného řádku.
  • Pohled pro experty

    Pro častou práci je možné zvolit režim Více možností.
  • Vyhledávání souborů

    Vyhledávaný výraz můžete zadat přímo do adresního řádku.
  • Rychlý přístup k souborům

    Pomocí funkce Nedávné je možné se rychle vrátit k právě prohlíženým souborům. Oblíbené soubory je také možné označit Hvězdičkou.