Závěrečná práce: Dorota Sklenárová: Detekce včelích patogenů pomocí imunoanalytických metod
Bakalářská práce
Detekce včelích patogenů pomocí imunoanalytických metod
Detection of honeybee pathogens using immunoanalytical methods
Anotace
Tato bakalářská práce se zabývá imunochemickým stanovením včelích patogenů Melissococcus plutonius (původce hniloby včelího plodu) a Paenibacillus larvae (původce moru včelího plodu). Byly připraveny konjugáty protilátek s biotinem a křenovou peroxidázou, ověření jejich funkčnosti proběhlo pomocí enzymového imunostanovení (ELISA). Pro zlepšení parametrů imunostanovení bylo enzymové značení následně …více
Abstract
This bachelor thesis examines immunochemical detection of honeybee pathogens Melisococcus plutonius and Paenibacillus larvae, which are responsible for European and American foulbrood, respectively. Conjugates of specific antibodies with biotin and horseradish peroxidase were prepared and tested in enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Afterwards, the assay parameters were improved by replacing …více
Klíčová slova
včelí patogeny Melissococcus plutonius Paenibacillus larvae imunochemie imunostanovení ELISA ULISA foton-upkonverzní nanočástice UCNP včelie patogény imunochémia imunostanovenie foton-upkonverzné nanočastice honeybee pathogens immunochemistry immunoassay photon-upconversion nanoparticleZadání práce
Včela medonosná je nejvýznamnějším hmyzím opylovačem, a je tak důležitá jak pro zemědělství, tak pro udržení biodiverzity. Včely jsou v současnosti ohrožovány chorobami různého původu; z bakteriálních chorob jsou nejpodstatnější mor včelího plodu (způsobený bakterií Paenibacillus larvae) a hniloba včelího plodu (bakterie Melissococcus plutonius). Pro minimalizaci rizika šíření těchto infekcí je nutné mít k dispozici spolehlivé metody pro rychlou diagnostiku nakažených kolonií. V současné době používané metody však mají řadu nevýhod, jako je dlouhá doba analýzy nebo nízká citlivost.
Cílem této práce bude využít imunoanalytické metody k detekci původců moru a hniloby včelího plodu. Nejprve budou nakultivovány obě bakterie (P. larvae a M. plutonius). Následně budou připraveny konjugáty protilátek s křenovou peroxidázou pro enzymové imunostanovení (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA). Parametry stanovení budou dále zlepšeny nahrazením enzymové značky foton-upkonverzními nanočásticemi (UCNPs). V poslední fázi budou optimalizované metody ověřeny na analýze reálných vzorků včel, larev a měli.
Cíle práce:
- Kultivace bakterií P. larvae a M. plutonius.
- Příprava konjugátů protilátek s křenovou peroxidázou a vývoj ELISA stanovení.
- Vývoj imunostanovení s využitím značek na bázi UCNPs.
- Ověření optimalizovaných metod na analýze reálných vzorků.
1. 6. 2021 10:15, doc. Mgr. Zdeněk Farka, Ph.D., učo 357740
Konzultant
Literatura
- POLÁCHOVÁ, Veronika; Matěj PASTUCHA; Zuzana MIKUŠOVÁ; Matthias Jürgen MICKERT; Antonín HLAVÁČEK; Hans-Heiner GORRIS; Petr SKLÁDAL a Zdeněk FARKA. Click-conjugated photon-upconversion nanoparticles in an immunoassay for honeybee pathogen Melissococcus plutonius. Nanoscale. Cambridge: Royal Society of Chemistry, 2019, roč. 11, č. 17, s. 8343-8351. ISSN 2040-3364. Dostupné z: https://doi.org/10.1039/C9NR01246J.
- MIKUŠOVÁ, Zuzana; Zdeněk FARKA; Matěj PASTUCHA; Veronika POLÁCHOVÁ; Radka OBOŘILOVÁ a Petr SKLÁDAL. Amperometric Immunosensor for Rapid Detection of Honeybee Pathogen Melissococcus Plutonius. Electroanalysis. WEINHEIM: WILEY-VCH Verlag GmbH, 2019, roč. 31, č. 10, s. 1969-1976. ISSN 1040-0397. Dostupné z: https://doi.org/10.1002/elan.201900252.
- KOSTIV, Uliana; Zdeněk FARKA; Matthias Jürgen MICKERT; Hans-Heiner GORRIS; Nadiia VELYCHKIVSKA; Ognen POP-GEORGIEVSKI; Matěj PASTUCHA; Eliška ODSTRČILÍKOVÁ; Petr SKLÁDAL a Daniel HORÁK. Versatile Bioconjugation Strategies of PEG-Modified Upconversion Nanoparticles for Bioanalytical Applications. Biomacromolecules. Washington, DC: American Chemical Society, 2020, roč. 21, č. 11, s. 4502-4513. ISSN 1525-7797. Dostupné z: https://doi.org/10.1021/acs.biomac.0c00459.
Práce na příbuzné téma
Seznam prací, které mají shodná klíčová slova.
-
Využití magnetických částic pro prekoncentraci analytu v imunochemických stanoveních
Bc. Zora Kuruczová -
Biokonjugáty foton-upkonverzních nanočástic pro stanovení typu lateral flow immunoassay
Bc. Michaela Heinzka -
Enzymová imunostanovení pro diagnostiku bakteriálních chorob včel
Bc. Pavlína Botíková -
Biokonjugace foton-upkonverzních nanočástic pro imunochemická stanovení
Mgr. Pavel Špaček -
Využití foton-upkonverzních nanočástic v jednomolekulových imunostanoveních
Mgr. Pavel Špaček -
Imunostanovení s fluorescenčními nanočásticemi pro detekci Melissococcus plutonius
Mgr. Miroslav Herczeg -
Využití foton-upkonverzních nanočástic v imunostanoveních
Mgr. Eliška Macháčová -
Pokročilé metody studia imunointerakcí
Ing. Zuzana Mikušová, Ph.D.




