Kryptosporidie (Cryptosporidiidae, Apicomplexa) jsou významní jednobuněční paraziti obratlovců včetně člověka, způsobující průjmové onemocnění zvané kryptosporidióza, které i v dnešní době moderní medicíny představuje globální zdravotní problém. Imunosuprimovaní jedinci často trpí chronickou recidivující kryptosporidiózou, jejíž následky mohou být fatální. Práce bude zaměřena na studium analýzy buněčné motility a invazivních procesů u invazivních stadií kryptosporidií s využitím kombinovaného přístupu mikroskopických a biochemických metod. Analýzy budou provedeny na modelovém druhu Cryptosporidium muris. Získaná data budou porovnána s informacemi z literatury souvisejícími s konceptem tzv. glideosomu, tj. klouzavého pohybu vázaného na substrát a závislého na přítomnosti aktin-myozinového motoru, který byl popsán u vysoce pohyblivých zoitů příbuzných výtrusovců rodů Toxoplasma a Plasmodium. Poznání odlišností v mechanizmu pohybu a invaze sporozoitů kryptosporidií by mohlo vyústit např. v odhalení specifických adaptací k parazitismu, což by mohlo upřesnit např. i dosud ne zcela jasnou fylogenetickou pozici těchto parazitů v rámci kmene Apicomplexa. Studie by současně umožnila definovat rozdíly kryptosporidií od ostatních výtrusovců, čímž by napomohla vytipování vhodných organely a molekul tohoto parazita, jakožto potenciálních cílů pro vývoj efektivnějších chemoterapeutik. Cíle práce: 1. Navázat na výsledky získané během řešení bakalářské práce. Excystace sporozoitů C. muris a video-dokumentace jejich buněčného pohybu in vitro. Osvojení si dalších cytochemických a morfologických metod, včetně elektronové mikroskopie. 2. Sledování motility sporozoitů při změně teploty, během inkubace v různých mediích jako i po aplikaci látek ovlivňujících polymerizaci aktinu (jasplakinolide, cytochalasin) nebo stabilitu mikrotubulů (např. oryzalin). Morfologická a biochemická analýza pohybových elementů sporozoitů. 3. Optimalizace zpracování vzorků a jejich frakcionace pro immunochemicko-identifikační metody. 4. Předběžná molekulární analýza genů kódující vybrané proteiny zapojené do pohybu. Doporučená literatura: Bonifacino, J.S., Dasso, M., Harford, J.B., Lippincott-Schwartz, K. (Eds.) 2004. Short protocols in cell biology: a compendium of methods from current protocols in cell biology. John Wiley Sons, New Persey, U.S.A. Caldas, L.A., Seabra, S.H., Attias, M, de Souza, W. 2013: The effect of kinase, actin, myosin and dynamin inhibitors on host cell egress by Toxoplasma gondii. Parasitology International 62: 475-482.