Techniky tzv. 3-dimenzionální (3D) buněčné kultivace umožňují napodobit přirozené buněčné interakce a mikroprostředí ve tkáních věrněji než tradiční in vitro modely založené na kultivaci adherentních buněk v jednoduché vrstvě. 3D in vitro modely se proto v současnosti stávají stále více využívaným nástrojem ke studiu fyziologických a patofyziologických procesů nebo k výzkumu účinků farmakologicky nebo toxikologicky významných chemických látek. Kultury buněčných sféroidů představují 3D techniku, která nachází uplatnění při výzkumu karcinogeneze, protinádorových léčiv nebo nádorově promočních a karcinogenních účinků environmentálních toxikantů. Řada výzkumů ukazuje, že klíčovou roli v procesu karcinogeneze mohou hrát populace tzv. progenitorových a dospělých (tkáňově-specifických) kmenových buněk. Cílem práce bude proto práce s kulturami sféroidů normálních a onkogenem-transformovaných potkaních jaterních progenitorových buněk WB-F344 / WB-neo a WB-ras, optimalizace metod pro hodnocení viability sféroidů, prozkoumání účinků vybraných chemických látek (antikarcinogenní látky, modelové nádorové promotery, hepatotoxiny a hepatokarcinogeny). Postup a cíle: 1) V rámci praktické části si studentka osvojí základy práce s tkáňovými kulturami (pasážování buněk, stanovení počtu buněk, mikroskopická dokumentace, hodnocení viability) a techniku přípravy buněčných sféroidů metodou 3D Petri Dish (tvorba a kultivace sféroidů, mikroskopická dokumentace a kvantitativní hodnocení s použitím automatické analýzy obrazu) 2) Realizace vlastních experimentů zaměřených na charakterizaci tvorby, morfologie a růstu sféroidů normálních potkaních jaterních progenitorových buněk (WB-F344 / WB-neo) a těchto buněk transformovaných ras-onkogenem (WB-ras) 3) Optimalizace metod hodnocení viability buněčných sféroidů (např. hodnocení příjmu neutrální červeně, metabolická konverze resazurinu) 4) Hodnocení účinků vybraných chemických látek na kultury potkaních jaterních progenitorových buněk WB-neo a WB-ras (např. vybrané modelové toxikanty, cytostatika, nádorové promotery) 5) Získané výsledky studentka samostatně vyhodnotí a zpracuje přehlednou a srozumitelnou formou (tabulky, grafy) do textu diplomové práce se standardním členěním. Praktická část bude uvedena teoretickým úvodem se zaměřením na problematiku chronických jaterních onemocnění a karcinogeneze, možné role kmenových a progenitorových buněk, a technik vhodných pro jejich 3D kultivace. Práce bude splňovat kritéria odborného textu, přinese aktuální přehled informací relevantních k tématu práce, provede diskuzi vlastních získaných výsledků ve srovnání s literaturou. Doporučená literatura: Disertační, diplomové a bakalářské práce zpracované na podobné téma dříve v Centru (DP S. Váňová, BP R. Škovroňová, BP Tomáš Cimr): lze najít a stáhnout z IS.MUNI.CZ Odborné vědecké články z Web of Science, PubMed, Scopus, Science Direct, Scholar Google apod. Více článků si student nalezne a stáhne z internetových databází.