PřF:Bi5599c Metody bioch. a buň. biol. cv - Informace o předmětu
Bi5599c Metody aplikované biochemie a buněčné biologie - cvičení
Přírodovědecká fakultapodzim 2020
- Rozsah
- 0/2/0. 2 kr. (plus ukončení). Ukončení: z.
- Vyučující
- Mgr. Jiřina Medalová, Ph.D. (cvičící)
RNDr. Vendula Hlaváčková Pospíchalová, Ph.D. (cvičící)
RNDr. Petra Křížková (cvičící) - Garance
- prof. Mgr. Vítězslav Bryja, Ph.D.
Ústav experimentální biologie – Biologická sekce – Přírodovědecká fakulta
Kontaktní osoba: Mgr. Jiřina Medalová, Ph.D.
Dodavatelské pracoviště: Ústav experimentální biologie – Biologická sekce – Přírodovědecká fakulta - Rozvrh
- Po 9:00–10:50 D36/215
- Předpoklady
- Bi3030 Fyziologie živočichů && NOW ( Bi5599 Metody bioch. a buň. biologie )
Předmět navazuje a tvoří logický celek s cvičením Fyziologie živočichů a Speciální metody fyziologie živočichů. - Omezení zápisu do předmětu
- Předmět je určen pouze studentům mateřských oborů.
Jiné omezení: Na předmět se vztahuje povinnost registrace, bez registrace může být znemožněn zápis předmětu! - Mateřské obory/plány
- předmět má 12 mateřských oborů, zobrazit
- Cíle předmětu
- Cílem předmětu je naučit studenty: provádět rutinně klasické i moderní techniky používané v základním i aplikovaném výzkumu (viz sylabus); využít metody a přístupy odrážející nejnovější trendy ve výzkumu molekul, specifických buněk a buněčných populací; použít získané manuální laboratorní dovednosti a dále je rozvíjet; vybrat si ze spektra technik tu nejvhodnější metodu podle znalostí získaných v rámci předmětu; pracovat v moderně vybavených pracovištích; získat praktické znalosti využitelné při vypracovávání diplomových a dizertačních prací
- Výstupy z učení
- Na konci tohoto kurzu bude student schopen: provádět rutinně klasické i moderní techniky používané v základním i aplikovaném výzkumu (viz sylabus); využít metody a přístupy odrážející nejnovější trendy ve výzkumu molekul, specifických buněk a buněčných populací; použít získané manuální laboratorní dovednosti a dále je rozvíjet; vybrat si ze spektra technik tu nejvhodnější metodu podle znalostí získaných v rámci předmětu; pracovat v moderně vybavených pracovištích; získat praktické znalosti využitelné při vypracovávání diplomových a dizertačních prací
- Osnova
- 1. Kultivace a využití buněčných kultur a) Bezpečnost práce v laboratoři, obsluha flow boxu, pasážování buněk, vysetí a ovlivnění buněk pro další experimenty - modifikace aktivity beta kateninu b) Transfekce buněk pomocí polykationtu PEI - metody stanovení účinnosti transfekce, vyhodnocení metodou TopFlash 2. Využití PCR pro stanovení úrovně exprese genů a) Izolace RNA afinitní purifikací, stanovení koncentrace a čistoty a stability izolované RNA. b) Přepis mRNA do cDNA (reverzní transkripce) c) Kvantitativní PCR v reálném čase pro zjištění míry exprese cílových genů beta kateninu, ověření specifity reakce pomocí tavné křivky, způsoby vyhodnocení výsledků, počítání koncentrací roztoků a ředění buněčných suspenzí 3. Stanovení exprese proteinů pomocí Western blottingu a) Příprava a kvantifikace SDS lyzátů b) Separace fragmentů proteinů pomocí elektroforézy c) mokrý blotting na PVDF membránu d) imunodetekce proteinů - beta kateninu a receptorů zapojených do jeho regulace
- Literatura
- Cell culture and upstream processing. Edited by M. Butler. 1st ed. New York: Taylor & Francis, 2007, xiv, 187. ISBN 9780415399692. info
- Mammalian cell culture : essential techniques. Edited by A. Doyle - J. B. Griffiths. Chichester: John Wiley & Sons, 1997, xv, 173. ISBN 0471970573. info
- Cancer cell culture : methods and protocols. Edited by Simon P. Langdon. Totowa, N.J.: Humana Press, 2004, xii, 360. ISBN 1588290794. info
- Animal cell culture :a practical approach. Edited by R. Ian Freshney. 2nd ed. Oxford: Oxford University Press, 1992, xix, 329 s. ISBN 0-19-963213-8. info
- Cell biological appplications of confocal microscopy. Edited by Brian Matsumoto. 2nd ed. Amsterdam: Academic Press, 2002, xii, 507. ISBN 0125804458. info
- Molecular cloning, A laboratory manual, Vol. 1-3, Eds. J. Sambrook and D. W. Russell, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York 2001
- Short protocols in molecular biology, Vol. 1 and 2, 5th edition, John Wiley and Sons, Inc., 2002
- Current protocols in cytometry, Vol. 1 and 2, Ed. J. P. Robinson, John Wiley and Sons, Inc., 1997
- Methods in Cell Biology, Vol. 75, Cytometry, 4th edition, New developments, Eds. Z. Darzynkiewicz, M. Roederer, H. J. Tanke, Elsevier Academic Press, 2004
- CROWTHER, John R. The ELISA guidebook. Totowa, N.J.: Humana Press, 2001, xi, 421. ISBN 0896037282. info
- Výukové metody
- Pokud to aktuální situace na MÚ dovolí, bude výuka rozložena do 3 bloků, zahrnujících krátké úvodní přednášky a praktické procvičování speciálních úkolů. Následně budou studenti provádět vybrané základní experimentální techniky v laboratoři. Studenti budou samostatně vyhodnocovat výsledky a tvořit závěry. V případě zrušení prezenční výuky bude příprava na vlastní experimenty prováděna pomocí komentovaných videí sdílených přes MS Teams.
- Metody hodnocení
- V případě prezenční formy studia musí studenti pro absolvování kurzu dodat zadané protokoly s vyhodnocenými výsledky. Součástí zápočtu je i písemný test. V případě distanční formy studia, bude místo protokolů vypracována esej na vybrané téma a test bude proveden pomocí IS nástrojů.
- Navazující předměty
- Další komentáře
- Studijní materiály
Předmět je vyučován každoročně.
- Statistika zápisu (podzim 2020, nejnovější)
- Permalink: https://is.muni.cz/predmet/sci/podzim2020/Bi5599c