Bi8980c Příprava a charakterizace proteinů I - cvičení

Přírodovědecká fakulta
jaro 2011
Rozsah
0/2. blok 5 dnů. 2 kr. (příf plus uk plus > 4). Doporučované ukončení: kz. Jiná možná ukončení: z.
Vyučující
RNDr. Lubomír Janda, Ph.D. (cvičící)
Ing. Blanka Pekárová, Ph.D. (cvičící)
Mgr. Radka Dopitová, Ph.D. (cvičící)
Garance
prof. RNDr. Jiří Fajkus, CSc.
Ústav experimentální biologie – Biologická sekce – Přírodovědecká fakulta
Kontaktní osoba: RNDr. Lubomír Janda, Ph.D.
Předpoklady
NOW( Bi8980 Exprese a purifikace proteinů )
Předpokladem pro porozumění předmětu je znalost základů biochemie nebo molekulární biologie
Omezení zápisu do předmětu
Předmět je určen pouze studentům mateřských oborů.
Mateřské obory/plány
předmět má 20 mateřských oborů, zobrazit
Anotace
Toto praktické cvičení je určeno pro studenty v počáteční fázi jejich vědecké kariéry a bude se zabývat nadexpresí proteinů v prokaryotních systémech pomocí různých vektorů, strategií purifikace proteinů a jejich charakterizací. Na konci tohoto praktického kurzu studenti budou schopni používat bionformatickou analýzu k plánování správného postupu pro expresi proteinů, navrhovat primery k optimálnímu složení genu na expresi; porovnat různé vektory s odlišnými kotvičkami spolu s různými hostitelskými kmeny; sledování funkční aktivity proteinů během různých purifikačních strategií.
Klíčová témata
1. Startegie klonování do expresních plasmidů. 2. Exprese a purifikace scFv produkovaných do cytoplasmy nebo do periplasmatického prostoru. 3. Exprese a purifikace rotliných proteinů (A. pET32 – thioredoxin - chaperon/B. pRSET – His.tag/ C. pET161DEST – Gate way technologie – Lumio.tag/D. pET28 – bez kotvičky.)
Studijní zdroje a literatura
    doporučená literatura
  • PRICE, Nicholas C. a Jacqueline NAIRN. Exploring proteins : a student's guide to experimental skills and methods. Oxford: Oxford University Press, 2009, xv, 512. ISBN 9780199205707. info
Přístupy, postupy a metody používané ve výuce
Laboratorní cvičení
Způsob ověření výstupů z učení a požadavky na ukončení
vypracování protokolu, test
Navazující předměty
Další komentáře
Předmět je vyučován každoročně.
Výuka probíhá blokově.
Předmět je zařazen také v obdobích jaro 2011 - akreditace, jaro 2010, podzim 2011, jaro 2012 - akreditace.