2019
Capillary electrophoresis-integrated immobilized enzyme reactor for kinetic and inhibition assays of beta-secretase as the Alzheimer's disease drug target
SCHEJBAL, Jan, Šárka ŠEFRANÁ, Roman ŘEMÍNEK a Zdeněk GLATZZákladní údaje
Originální název
Capillary electrophoresis-integrated immobilized enzyme reactor for kinetic and inhibition assays of beta-secretase as the Alzheimer's disease drug target
Autoři
SCHEJBAL, Jan (203 Česká republika, domácí), Šárka ŠEFRANÁ (203 Česká republika, domácí), Roman ŘEMÍNEK (203 Česká republika, domácí) a Zdeněk GLATZ (203 Česká republika, garant, domácí)
Vydání
Journal of Separation Science, Weinheim, WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. 2019, 1615-9306
Další údaje
Jazyk
angličtina
Typ výsledku
Článek v odborném periodiku
Obor
10406 Analytical chemistry
Stát vydavatele
Německo
Utajení
není předmětem státního či obchodního tajemství
Odkazy
Impakt faktor
Impact factor: 2.878
Kód RIV
RIV/00216224:14310/19:00107212
Organizační jednotka
Přírodovědecká fakulta
UT WoS
000461674900013
Klíčová slova anglicky
beta-secretase; capillary electrophoresis; immobilized enzyme reactor; inhibition; magnetic particles
Štítky
Příznaky
Mezinárodní význam, Recenzováno
Změněno: 12. 3. 2020 11:51, Mgr. Marie Šípková, DiS.
V originále
Capillary electrophoresis-integrated immobilized enzyme reactors are becoming an increasingly popular alternative for enzyme kinetic and inhibition assays thanks to their unique set of features including cost effectiveness, repeated use of the enzyme, minuscule sample consumption, rapid analysis time and easy automation. In this work we present the development and application of a CE-integrated immobilized enzyme reactor based on magnetic particles for kinetic and inhibition studies of beta secretase, a key enzyme in the development of Alzheimer’s disease and a promising drug target. We document the optimization of the immobilization procedure, characterization of immobilized beta secretase, optimization of a mutually compatible incubation protocol and separation method as well as the production of the CE-integrated immobilized enzyme reactor. The applicability of the CE-integrated immobilized enzyme reactor was demonstrated by kinetic assay with an unlabelled substrate and by inhibition assays using three structurally different reference inhibitors. The resulting kinetic and inhibition parameters clearly support the applicability of the herein presented method as well as document the fundamental phenomena which need to be taken in account when comparing the results to other methods.
Česky
Reaktory z imobilizovaných enzymů integrovaných do kapilární elektroforézy představují stále populárnější alternativu pro enzymová kinetická a inhibiční stanovení díky jejich jedinečnému souboru vlastností včetně ekonomičnosti, opakovanému použití enzymu, minimální spotřebě vzorku, rychlé analýze a jednoduché automatizaci. V této práci představujeme vývoj a aplikaci reaktoru z imobilizovaného enzymu integrovaného do CE založeného na magnetických částicích pro kinetické a inhibiční stanovení beta sekretázy, klíčového enzymu v rozvoji Alzheimerovy choroby a slibného cíle léčiv. Dokumentujeme optimalizaci imobilizačního postupu, charakterizaci imobilizované beta sekretázy, optimalizaci vzájemně kompatibilního inkubačního protokolu a separační metody, stejně tak jako tvorbu reaktoru z imobilizovaného enzymu integrovaného do CE. Použitelnost reaktoru z imobilizovaného enzymu integrovaného do CE byla demonstrována kinetickým stanovením pomocí neznačeného substrátu a inhibičními stanoveními za využití tři strukturně odlišných referenčních inhibitorů. Výsledné kinetické a inhibiční parametry jasně podporují použitelnost zde prezentované metody stejně jako dokumentují zákonitosti, na které je nutné brát zřetel při porovnávání výsledků s jinými metodami.
Návaznosti
| GA16-06106S, projekt VaV |
|