Efektivní metodika pro stanovení haplogenotypů lektinu vázajícího manózu a role tohoto receptoru v etiopatogenezi onemocnění dutiny ústní

MOHLEROVÁ, Nora, Jana MRÁZKOVÁ, Petr ŠÍSTEK, Jan LOCHMAN, Lydie IZAKOVIČOVÁ HOLLÁ a Petra BOŘILOVÁ LINHARTOVÁ. Efektivní metodika pro stanovení haplogenotypů lektinu vázajícího manózu a role tohoto receptoru v etiopatogenezi onemocnění dutiny ústní. In 63. Studentská vědecká konference LF MU. 2019. ISBN 978-80-210-9285-3.

Základní údaje

• Originální název: Efektivní metodika pro stanovení haplogenotypů lektinu vázajícího manózu a role tohoto receptoru v etiopatogenezi onemocnění dutiny ústní
• Název anglicky: Effective methodology for determination of mannose-binding lectin haplogenotypes and roles of this receptor in the etiopathogenesis of oral disease
• Autoři: MOHLEROVÁ, Nora (203 Česká republika, domácí), Jana MRÁZKOVÁ (203 Česká republika, domácí), Petr ŠÍSTEK (203 Česká republika), Jan LOCHMAN (203 Česká republika, domácí), Lydie IZAKOVIČOVÁ HOLLÁ (203 Česká republika, domácí) a Petra BOŘILOVÁ LINHARTOVÁ (203 Česká republika, garant, domácí).
• Vydání: 63. Studentská vědecká konference LF MU, 2019.

Další údaje

• Originální jazyk: čeština
• Typ výsledku: Konferenční abstrakt
• Obor: 10603 Genetics and heredity
• Stát vydavatele: Česká republika
• Utajení: není předmětem státního či obchodního tajemství
• Kód RIV: RIV/00216224:14110/19:00108549
• Organizační jednotka: Lékařská fakulta
• ISBN: 978-80-210-9285-3
• Klíčová slova anglicky: mannose-binding lectin haplogenotypes; etiopathogenesis of oral disease
• Štítky: rivok

Anotace

Úvod a cíl: Lektin vázající manózu (MBL) hraje důležitou roli v rámci vrozené imunity. Tento receptor rozpoznávající molekulární vzory na povrchu patogenů je studován a asociován s řadou chorob dutiny ústní (recidivující aftózní stomatitidou, parodontitidou, orálním lichen planus, zubním kazem). Cílem práce bylo navrhnout efektivní metodiku pro identifikaci funkčních polymorfizmů v MBL2 genu, jejichž alelické a genotypové kombinace ovlivňují expresi genu MBL2. Metodika: Byly vybrány tři polymorfizmy v oblasti exonu 1 v kodonech 52, 54 a 57 (těm odpovídají alely D, B a C), dále dva polymorfizmy v promotoru 1 na pozicích -550 (alelová varianta H/L) a -221 (alelová varianta X/Y) a na pozici +4 v 5' nepřekládané oblasti (alelová varianta P/Q) na souboru 353 osob české národnosti. Byl navržen originální protokol pro stanovení variant všech šesti polymorfizmů v rámci jedné SNaPshot analýzy. Pro zpracování dat a následnou haplotypovou/haplogenotypovou analýzu byl vyvinut originální algoritmus. Validace SNaPshot analýzy byla provedena komparací získaných výsledků u 10 vybraných vzorků pomocí sekvenační analýzy a alelově specifické PCR, která se standardně používá pro genotypizaci MBL2. Výsledky: Optimalizovaný protokol byl nastaven na 100 ng vstupní genomové DNA pro analýzu všech šesti polymorfizmů. Spotřeba komerční SNaPshot reakční směsi je 5× nižší než je doporučeno v přiloženém návodu při zachování stejné účinnosti. Genotypové rozložení u všech studovaných variant bylo v Hardy-Weinbergerově rovnováze (P>0,05). Frekvence minoritních alel všech šesti polymorfizmů ve zvolené kohortě odpovídalo frekvencím v evropské populaci. Výsledné genotypy získané touto metodou byly ve 100% shodě s výsledky získanými dalšími dvěma metodickými přístupy. Závěr: Pro určení šesti polymorfizmů v genu MBL2 jsme vyvinuli metodiku, která je rychlá, spolehlivá, nenáročná na vstupní množství DNA a ekonomicky výhodná. Metodika a algoritmus pro sestavení haplotypů/haplogenotypů jsou nyní připraveny pro využití při genetických asociačních studiích, které jsou zaměřeny nejenom na choroby dutiny ústní, ale i na další onemocnění. Poděkování: Studie byla podpořena z grantu NV17-30439A, ze specifického výzkumu MUNI/A/1546/2018 a z prostředků poskytnutých Lékařskou fakultou MU juniorskému výzkumníkovi Petře Bořilové Linhartové.

Anotace anglicky

Mannose-binding lectin (MBL) plays an important role in innate immunity. This receptor recognizing molecular patterns on the surface of pathogens is studied and associated with a number of diseases of the oral cavity (recurrent aphthous stomatitis, periodontitis, oral lichen planus, tooth decay). The aim of this work was to design an effective methodology for the identification of functional polymorphisms in the MBL2 gene, whose allelic and genotypic combinations affect the expression of the MBL2 gene.

Návaznosti

• MUNI/A/1546/2018, interní kód MU: Název: Etiopatogeneze, diagnostika a léčba vybraných onemocnění dutiny ústní a jejich souvislost s celkovým zdravotním stavem

Investor: Masarykova univerzita, Etiopatogeneze, diagnostika a léčba vybraných onemocnění dutiny ústní a jejich souvislost s celkovým zdravotním stavem, DO R. 2020_Kategorie A - Specifický výzkum - Studentské výzkumné projekty

• NV17-30439A, projekt VaV: Název: Moderní biotechnologické a behaviorální přístupy ve výzkumu zubního kazu a strategie jeho prevence
• ROZV/23/LF1/2019, interní kód MU: Název: Studium genetické predispozice hostitele a jeho mikrobiomu ve vztahu k chorobám dutiny ústní na jícnu

Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Studium genetické predispozice hostitele a jeho mikrobiomu ve vztahu k chorobám dutiny ústní na jícnu, Interní rozvojové projekty