2003
Zrání monoblastů BM2 je doprovázeno zvýšenou expresí vimentinu
ŠMARDA, Jan, Eva ZAHRADNÍČKOVÁ, Hana KONEČNÁ, Zbyněk ZDRÁHAL, Jana ŠMARDOVÁ et. al.Základní údaje
Originální název
Zrání monoblastů BM2 je doprovázeno zvýšenou expresí vimentinu
Název anglicky
Vimentin Expression Is Upregulated In Maturing BM2 Monoblasts
Autoři
ŠMARDA, Jan (203 Česká republika, garant), Eva ZAHRADNÍČKOVÁ (203 Česká republika), Hana KONEČNÁ (203 Česká republika), Zbyněk ZDRÁHAL (203 Česká republika) a Jana ŠMARDOVÁ (203 Česká republika)
Vydání
Brno, VII. Pracovní setkání biochemiků a molekulárních biologů, s. 68-68, 2003
Nakladatel
Masarykova univerzita v Brně
Další údaje
Jazyk
čeština
Typ výsledku
Stať ve sborníku
Obor
30200 3.2 Clinical medicine
Stát vydavatele
Česká republika
Utajení
není předmětem státního či obchodního tajemství
Kód RIV
RIV/00216224:14310/03:00009852
Organizační jednotka
Přírodovědecká fakulta
ISBN
80-210-3053-4
Klíčová slova anglicky
monoblasts; vimentin; differentiation; proteomics
Štítky
Změněno: 6. 12. 2004 15:13, prof. RNDr. Jan Šmarda, CSc.
V originále
Buněčná linie BM2 byla připravena infekcí nezralých kuřecích myeloidních buněk virem ptačí myeloblastózy,který transdukuje onkogen v-myb. Vzniklé monoblasty konstitutivně exprimují v-myb a jejich terminální diferenciace je proto zablokována. Obnovení diferenciační dráhy buněk BM2 lze dosáhnout např. působením forbolového esteru TPA, inhibitorem histonových deacetyláz trichostatinem A nebo prostřednictvím aktivovaných jaderných receptorů pro kyselinu retinovou. V této práci jsme se zaměřili na charakterizaci diferencujících se buněk BM2 a hledání proteinových markerů využitelných při diferenciačních studiích. Prokázali jsme, že působením forbolového esteru TPA se v jaderné frakci zrajících buněk BM2 objevuje dominantní protein o molekulové hmotnosti 55 kDa, který není přítomen v buňkách BM2 exprimujících lidský gen RAR vystavených kombinovanému působení TPA/RA. Tento protein byl po elektroforéze SDS-PAGE podroben redukci, alkylaci a proteolýze trypsinem přímo v gelu. Po extrakci z gelu byla molekulová hmotnost vzniklých peptidů určena hmotnostní spektrometrií MALDI-TOF. Srovnáním získaných dat s údaji v databázích jsme tento protein identifikovali jako vimentin. Experimentálně jsme tento závěr potvrdili vimentin-specifickou protilátkou. Protože exprese vimentinu stoupá v buňkách BM2 indukovaných k diferenciaci působením TPA a trichostatinu A a zůstává nezměněna u buněk BM2RAR indukovaných RA, můžeme vyvodit závěr, že vimentin představuje vhodný marker pro rozlišení diferenciačních drah buněk BM2.
Anglicky
BM2 cell line was prepared by infection of chicken myeloid progenitor cells with AMV transducing v-myb oncogene. resulting monoblasts constituively express v-myb and their terminal differentiation steps are therefore blocked. BM2 differentiation pathway can be resumed using TPA, trichostatin A or by ligand-activated retinoic acid receptors. In this work we focused on characterization of of differentiating BM2 cells and search for protein markers useful for differentiation studies. We showed that dominant protein of 55 kDa appears in nuclear fraction of TPA-treated BM2 cells. Interestingly,this protein is absent from BM2 cells expressing human RAR and treated with TPA/RA. this protein was analyzed by SDS-PAGE, extracted from the gel and molecular mass of resulting peptides was determined by mass spectrometry MALDI-TOF. We compared our data with mass spectra in databases in identified this protein as vimentin. We confirmed rhis conslusion experimentally using vimentin-specific antibody. Because vimentin-expression does increase in BM2 cells induced by TPA or trichostatin A and does not increase in BM2RAR cells treated with RA we conclude that vimentin is a suitable marker for distinguishing of BM2 differentiation pahways
Návaznosti
| GA301/03/1055, projekt VaV |
| ||
| MSM 143100008, záměr |
|