The Identification of Catalytic Pentad in the Haloalkane Dehalogenase DhmA from Mycobacterium avium N85: Reaction Mechanism and Molecular Evolution

PAVLOVÁ, Martina, Martin KLVAŇA, Andrea JESENSKÁ, Zbyněk PROKOP, Hana KONEČNÁ, T. SATO, M. TSUDA, Yuji NAGATA a Jiří DAMBORSKÝ. The Identification of Catalytic Pentad in the Haloalkane Dehalogenase DhmA from Mycobacterium avium N85: Reaction Mechanism and Molecular Evolution. JOURNAL OF STRUCTURAL BIOLOGY. 2006, roč. 1/2006, č. 1, s. 9999-10007. ISSN 1047-8477.

Základní údaje

• Originální název: The Identification of Catalytic Pentad in the Haloalkane Dehalogenase DhmA from Mycobacterium avium N85: Reaction Mechanism and Molecular Evolution
• Název česky: Identifikace katalytických pentád v haloalkán dehalogenáze DhmA y bakterie Mycobacterium avium N85:reakční mechanismus a molekulární evoluce.
• Autoři: PAVLOVÁ, Martina (203 Česká republika), Martin KLVAŇA (203 Česká republika), Andrea JESENSKÁ (203 Česká republika), Zbyněk PROKOP (203 Česká republika), Hana KONEČNÁ (203 Česká republika), T. SATO (392 Japonsko), M. TSUDA (392 Japonsko), Yuji NAGATA (392 Japonsko) a Jiří DAMBORSKÝ (203 Česká republika, garant).
• Vydání: JOURNAL OF STRUCTURAL BIOLOGY, 2006, 1047-8477.

Další údaje

• Originální jazyk: angličtina
• Typ výsledku: Článek v odborném periodiku
• Obor: 10600 1.6 Biological sciences
• Stát vydavatele: Spojené státy
• Utajení: není předmětem státního či obchodního tajemství
• WWW: URL
• Impakt faktor: Impact factor: 3.496
• Kód RIV: RIV/00216224:14310/06:00017450
• Organizační jednotka: Přírodovědecká fakulta
• UT WoS: 000243951800010
• Klíčová slova anglicky: Haloalkane dehalogenase DhmA; Mycobacterium avium N85; expression ; Site-directed mutagenesis
• Štítky: Expression, Haloalkane dehalogenase DhmA, Mycobacterium avium N85, site-directed mutagenesis
• Příznaky: Recenzováno

Anotace

Haloalkane dehalogenase DhmA from Mycobacterium avium N85 showed poor expression and low stability when produced in Escherichia coli. Here we present expression DhmA in newly constructed pK4RP rhodococcal expression system in a soluble and stable form. Site-directed mutagenesis was used for the identification of a catalytic pentad, which makes up the reaction machinery of all currently known haloalkane dehalogenases. The putative catalytic triad Asp123, His279, Asp250 and the first halide-stabilizing residue Trp124 were deduced from sequence comparisons. The second stabilizing residue Trp164 was predicted from a homology model. Five point mutants in the catalytic pentad were constructed, tested for activity and were found inactive. A two-step reaction mechanism was proposed for DhmA. Evolution of different types of catalytic pentads and molecular adaptation towards the synthetic substrate 1,2-dichloroethane within the protein family is discussed.

Anotace česky

Haloalkán dehalogenáza DhmA z bakterie Mycobacterium avium N85 vykazovala nizkou stabilitu a spatnou expresi, kdyz byla vložena do Escherichia coli. v článku je prezentována exprese DhmA v nově konstruovaný rhodokokální expresní systém pK4RP,který byl stabilní........

Návaznosti

• MSM0021622412, záměr: Název: Interakce mezi chemickými látkami, prostředím a biologickými systémy a jejich důsledky na globální, regionální a lokální úrovni (INCHEMBIOL) (Akronym: INCHEMBIOL)

Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Interakce mezi chemickými látkami, prostředím a biologickými systémy a jejich důsledky na globální , regionální a lokální úrovni

• MSM0021622413, záměr: Název: Proteiny v metabolismu a při interakci organismů s prostředím

Investor: Ministerstvo školství, mládeže a tělovýchovy ČR, Proteiny v metabolismu a při interakci organismů s prostředím