Stanovení bakteriolytické aktivity komplemetu u různých druhů obratlovců metodou biolouminiscence

TOLAROVÁ, Soňa; Pavel HYRŠL a Monika DUŠKOVÁ. Stanovení bakteriolytické aktivity komplemetu u různých druhů obratlovců metodou biolouminiscence. In Zoologické dny Brno 2007. 2007. ISBN 978-80-903329-7-3.

Základní údaje

Originální název

Stanovení bakteriolytické aktivity komplemetu u různých druhů obratlovců metodou biolouminiscence

Název česky

Stanovení bakteriolytické aktivity komplemetu u různých druhů obratlovců metodou biolouminiscence

Název anglicky

Bioluminescent determination of bacteriolytic complement activity of different vertebrates

Autoři

TOLAROVÁ, Soňa; Pavel HYRŠL a Monika DUŠKOVÁ

Vydání

Zoologické dny Brno 2007, 2007

---

Další údaje

Jazyk

čeština

Typ výsledku

Konferenční abstrakt

Obor

30102 Immunology

Stát vydavatele

Česká republika

Utajení

není předmětem státního či obchodního tajemství

Organizační jednotka

Přírodovědecká fakulta

ISBN

978-80-903329-7-3

Klíčová slova anglicky

complement; bioluminescence

Štítky

bioluminescence, complement

---

Anotace

V originále

Komplementový systém je humorální složka nespecifické imunity typická pro obratlovce. Je to soubor přibližně 30 sérových proteinů, které mohou být volné nebo membránově vázané. Jednotlivé proteiny se v séru vyskytují v inaktivní formě, avšak specifický signál způsobuje aktivaci první složky, která spouští kaskádu reakcí vedoucích k aktivaci složek následujících. Konečným výsledkem kaskády je sestavení terminálního komplexu MAC (membrane attack complex), který vytváří póry v membráně cílové buňky a způsobuje tak její poškození a lyzi. Komplement může být aktivován cestou klasickou (vyžadující protilátku vázanou k povrchu patogenu), alternativní (aktivována povrchovými molekulami patogenu) nebo lektinovou. Lektinová cesta je spuštěna živočišnými lektiny a je typická pouze pro savce, u ryb definována nebyla. Mezi nejdůležitější funkce komplementu patří bakteriolytická aktivita (zejména proti G- bakteriím), účast při regulaci zánětu, opsonizace cizorodých částic, čímž je usnadněna jejich fagocytóza. Byla použita metoda založená na principu bioluminiscence, kdy dochází k reakci mezi enzymem a substrátem. Tato reakce vyžaduje přítomnost ATP, který je produkován pouze živými buňkami. Pro stanovení byl použit rekombinantní bakteriální kmen E. coli, do jehož plasmidu byly vloženy geny kódující enzym luciferázu a jeho substrát luciferin. Naměřené hodnoty bioluminiscence bakterií jsou úměrné jejich viabilitě. Jako vzorky pro stanovení komplementu byla použita krevní plasma nebo sérum kapra, lína, myši, morčete a člověka. Komplement obsažený ve vzorku lyzuje bioluminiscenční bakterie a výsledná aktivita komplementu je odečítána z křivky viability bakterií. Každý živočišný druh vyžaduje specifickou teplotu a čas inkubace vzorků. V dalších experimentech bude spektrum sledovaných živočišných druhů ještě rozšířeno. Cílem je optimalizace této metody pro porovnání aktivity komplementu u vybraných druhů obratlovců a srovnání aktivity klasické a alternativní cesty.

Anglicky

Komplementový systém je humorální složka nespecifické imunity typická pro obratlovce. Je to soubor přibližně 30 sérových proteinů, které mohou být volné nebo membránově vázané. Jednotlivé proteiny se v séru vyskytují v inaktivní formě, avšak specifický signál způsobuje aktivaci první složky, která spouští kaskádu reakcí vedoucích k aktivaci složek následujících. Konečným výsledkem kaskády je sestavení terminálního komplexu MAC (membrane attack complex), který vytváří póry v membráně cílové buňky a způsobuje tak její poškození a lyzi. Komplement může být aktivován cestou klasickou (vyžadující protilátku vázanou k povrchu patogenu), alternativní (aktivována povrchovými molekulami patogenu) nebo lektinovou. Lektinová cesta je spuštěna živočišnými lektiny a je typická pouze pro savce, u ryb definována nebyla. Mezi nejdůležitější funkce komplementu patří bakteriolytická aktivita (zejména proti G- bakteriím), účast při regulaci zánětu, opsonizace cizorodých částic, čímž je usnadněna jejich fagocytóza. Byla použita metoda založená na principu bioluminiscence, kdy dochází k reakci mezi enzymem a substrátem. Tato reakce vyžaduje přítomnost ATP, který je produkován pouze živými buňkami. Pro stanovení byl použit rekombinantní bakteriální kmen E. coli, do jehož plasmidu byly vloženy geny kódující enzym luciferázu a jeho substrát luciferin. Naměřené hodnoty bioluminiscence bakterií jsou úměrné jejich viabilitě. Jako vzorky pro stanovení komplementu byla použita krevní plasma nebo sérum kapra, lína, myši, morčete a člověka. Komplement obsažený ve vzorku lyzuje bioluminiscenční bakterie a výsledná aktivita komplementu je odečítána z křivky viability bakterií. Každý živočišný druh vyžaduje specifickou teplotu a čas inkubace vzorků. V dalších experimentech bude spektrum sledovaných živočišných druhů ještě rozšířeno. Cílem je optimalizace této metody pro porovnání aktivity komplementu u vybraných druhů obratlovců a srovnání aktivity klasické a alternativní cesty.