Vliv homocysteinu na integritu DNA spermií

a 2010

Vliv homocysteinu na integritu DNA spermií

MATEJOVIČOVÁ, Milena, Michaela KRÁLÍKOVÁ, Jitka MELOUNOVÁ, Jana ŽÁKOVÁ, Igor CRHA et. al.

Základní údaje

Originální název

Vliv homocysteinu na integritu DNA spermií

Název česky

Vliv homocysteinu na integritu DNA spermií

Název anglicky

Effect of homocysteine on sperm DNA integrity

Autoři

MATEJOVIČOVÁ, Milena, Michaela KRÁLÍKOVÁ, Jitka MELOUNOVÁ, Jana ŽÁKOVÁ a Igor CRHA

Vydání

20. sympozium asistované reprodukce a 9. česko-slovenská konference reprodukční gynekologie, Praktická gynekologie 2010, (S1): 187-8, 2010

Další údaje

Jazyk

čeština

Typ výsledku

Konferenční abstrakt

Obor

10600 1.6 Biological sciences

Stát vydavatele

Česká republika

Utajení

není předmětem státního či obchodního tajemství

Odkazy

URL

Organizační jednotka

Lékařská fakulta

ISSN

Klíčová slova česky

Homocystein, DNA, spermie, kometová analýza

Klíčová slova anglicky

Homocysteine, DNA, Sperm, Comet assay

Štítky

homocysteine, sperm DNA

Změněno: 17. 1. 2011 12:03, Mgr. Milena Matejovičová, Ph.D.

Anotace

V originále

Úvod: Schopnost homocysteinu způsobovat oxidativní stres je všeobecně známa. Reaktivní formy kyslíku (ROS) vznikají během autooxidace homocysteinu a ke vzniku neplodnosti mužů přispívají v 30 – 80 % případů. Jedním z mechanismů je přímé poškození DNA spermií. Normálně je DNA ve spermiích pevně obalena protaminy, které ji chrání před atakem ROS. Ve spermiích neplodných mužů byla prokázána nedostatečná protaminace DNA, jejímž následkem je zvýšená citlivost DNA k oxidativnímu poškození. Cílem této práce bylo zjistit, zda má zvýšená koncentrace homocysteinu v ejakulátu vliv na integritu DNA spermií. Materiál a metodika: Byly použity vzorky ejakulátů odebrané v Centru asistované reprodukce FN Brno. Všechny vzorky byly vyšetřeny mikroskopicky a měly normální hodnoty spermiogramu. Ejakulát byl ponechán 1 hodinu při pokojové teplotě do úplného zkapalnění a přibližně 1 ml zkapalněného ejakulátu byl zmrazen v tekutém dusíku bez kryoprotektivních látek a uchován pro další analýzu. Po rozmražení při pokojové teplotě byl každý vzorek rozdělen po 100 ul a bylo přidáno 100 ul roztoku homocysteinu v koncentracích 5, 12,5, 25 a 50 umol/l. Vzorky pak byly inkubovány přes noc (14 hodin) v termostatu při teplotě 36 stupních C. Ke sledování integrity DNA jsme využili kometovou analýzu. Metoda je založena na elektroforéze jaderné DNA buněk, imobilizovaných v agarózovém gelu, která následuje po lýze a denaturaci DNA. Použita byla alkalicko-neutrální modifikace analýzy (denaturace v alkalickém prostředí s pH > 13, elektroforéza v Tris-borátovém pufru, pH = 10). Vizualizace komet byla provedena barvením roztokem dusičnanu stříbrného, poškození DNA bylo vyjádřeno jako % DNA v ohonu komety a délka ohonu. Pro srovnání poškození DNA byl použit párový t-test. Výsledky: Bazální poškození představovalo 72% DNA v ohonu, statisticky významné zvýšení poškození bylo pozorováno pouze při inkubaci spermií s homocysteinem v koncentraci 50 umol/l (81,5% DNA v ohonu). Závěr: Homocystein přidaný k ejakulátu normospermiků mírně zvyšuje bazální poškození DNA.

Citovat

MATEJOVIČOVÁ, Milena, Michaela KRÁLÍKOVÁ, Jitka MELOUNOVÁ, Jana ŽÁKOVÁ a Igor CRHA. Vliv homocysteinu na integritu DNA spermií. In 20. sympozium asistované reprodukce a 9. česko-slovenská konference reprodukční gynekologie, Praktická gynekologie 2010, (S1): 187-8. 2010. ISSN 1801-8750.

@proceedings{920534,
   author = {Matejovičová, Milena and Králíková, Michaela and Melounová, Jitka and Žáková, Jana and Crha, Igor},
   booktitle = {20. sympozium asistované reprodukce a 9. česko-slovenská konference reprodukční gynekologie, Praktická gynekologie 2010, (S1): 187-8},
   keywords = {Homocysteine, DNA, Sperm, Comet assay},
   language = {cze},
   title = {Vliv homocysteinu na integritu DNA spermií},
   url = {http://www.praktickagynekologie.cz/pdf/pg_10_03_03.pdf},
   year = {2010}
}

TY  - CONF
ID  - 920534
AU  - Matejovičová, Milena - Králíková, Michaela - Melounová, Jitka - Žáková, Jana - Crha, Igor
PY  - 2010
TI  - Vliv homocysteinu na integritu DNA spermií
KW  - Homocysteine, DNA, Sperm, Comet assay
UR  - http://www.praktickagynekologie.cz/pdf/pg_10_03_03.pdf
N2  - Úvod: Schopnost homocysteinu způsobovat oxidativní stres je všeobecně známa. Reaktivní formy kyslíku (ROS) vznikají během autooxidace homocysteinu a ke vzniku neplodnosti mužů přispívají v 30 – 80 % případů. Jedním z mechanismů je přímé poškození DNA spermií. Normálně je DNA ve spermiích pevně obalena protaminy, které ji chrání před atakem ROS. Ve spermiích neplodných mužů byla prokázána nedostatečná protaminace DNA, jejímž následkem je zvýšená citlivost DNA k oxidativnímu poškození. Cílem této práce bylo zjistit, zda má zvýšená koncentrace homocysteinu v ejakulátu vliv na integritu DNA spermií. Materiál a metodika: Byly použity vzorky ejakulátů odebrané v Centru asistované reprodukce FN Brno. Všechny vzorky byly vyšetřeny mikroskopicky a měly normální hodnoty spermiogramu. Ejakulát byl ponechán 1 hodinu při pokojové teplotě do úplného zkapalnění a přibližně 1 ml zkapalněného ejakulátu byl zmrazen v tekutém dusíku bez kryoprotektivních látek a uchován pro další analýzu. Po rozmražení při pokojové teplotě byl každý vzorek rozdělen po 100 ul a bylo přidáno 100 ul roztoku homocysteinu v koncentracích 5, 12,5, 25 a 50 umol/l. Vzorky pak byly inkubovány přes noc (14 hodin) v termostatu při teplotě 36 stupních C. Ke sledování integrity DNA jsme využili kometovou analýzu. Metoda je založena na elektroforéze jaderné DNA buněk, imobilizovaných v agarózovém gelu, která následuje po lýze a denaturaci DNA. Použita byla alkalicko-neutrální modifikace analýzy (denaturace v alkalickém prostředí s pH > 13, elektroforéza v Tris-borátovém pufru, pH = 10). Vizualizace komet byla provedena barvením roztokem dusičnanu stříbrného, poškození DNA bylo vyjádřeno jako % DNA v ohonu komety a délka ohonu. Pro srovnání poškození DNA byl použit párový t-test. Výsledky: Bazální poškození představovalo 72% DNA v ohonu, statisticky významné zvýšení poškození bylo pozorováno pouze při inkubaci spermií s homocysteinem v koncentraci 50 umol/l (81,5% DNA v ohonu). Závěr: Homocystein přidaný k ejakulátu normospermiků mírně zvyšuje bazální poškození DNA.
ER  -

MATEJOVIČOVÁ, Milena, Michaela KRÁLÍKOVÁ, Jitka MELOUNOVÁ, Jana ŽÁKOVÁ a Igor CRHA. Vliv homocysteinu na integritu DNA spermií. In \textit{20. sympozium asistované reprodukce a 9. česko-slovenská konference reprodukční gynekologie, Praktická gynekologie 2010, (S1): 187-8}. 2010. ISSN~1801-8750.

Podrobný výpis o publikaci