In vitro biotesty jsou velmi užitečné při orientačním testování přítomnosti látek se specifickými účinky v životním prostředí. Pro estrogenní a androgenní látky se běžně používají jak biotesty se savčími buňkami, tak i kvasinkové biotesty. Oba typy testů mají své výhody i nevýhody. Testy se savčími buňkami jsou často citlivější, kvasinkové testy zase levnější a vhodnější pro použití v polních podmínkách. Cílem diplomové práce bude: 1) Vypracování literární rešerše aktuálních poznatků o in vitro testování estrogenity a androgenity vzorků ze životního prostředí. 2) Praktické srovnání parametrů savčích a kvasinkových biotestů používaných na pracovišti RECETOX pro endokrinní disrupci (androgenita, estrogenita) 3) Optimalizace kvasinkového in vitro biotestu pro použití ve formě „kitu“ pro testování ED ve vodách v terénu bez nutnosti sterilní práce. 1) Zvládnutí metodiky kvasinkových testů pro detekci estrogenity a androgenity in vitro Během listopadu, prosince 2014 se studentka naučí samostatně provádět standardní kvasinkový test estrogenity a androgenity v destičkovém i zkumavkovém uspořádání. Termín: konec roku 2014 2) Optimalizace kvasinkových testů pro rychlou detekci ED v polních podmínkách V návaznosti na výzkumný projekt, který řeší vedoucí DP a jehož ukončení je na jaře 2015, začne studentka během listopadu 2014 již s optimalizací kvasinkového testu (estrogenity i androgenity) pro měření v polních podmínkách, a to v následujících krocích: 1) Lyofilizace kvasinek ve zkumavkách s následným zatavením do fólie, 2) otestování životaschopnosti měřením standardů na přenosném luminometru, 3) ověření možnosti používat místo expozičního média vodu či upravené médium (např. lyofilizované). 4) sepsání podrobné metodiky testování za použití nově vyvinutého „kitu“ pro estrogenitu a androgenitu Termín: březen 2015, sepsání podrobné metodiky duben 2014 3) Srovnání parametrů testů toxicity na savčích buňkách a kvasinkách Provedením standardních testů androgenity a estrogenity na savčích buňkách (MVLN, MDA) a kvasinkách budou porovnány výhody a nevýhody testování u obou typů modelů. Budou se srovnávat především parametry: 1) Odolnost vůči cytotoxickému působení látek 2) Srovnání parametrů EC10, EC50, LOEC, indukční faktor 3) Porovnání rychlosti provedení, a další možné parametry Termín: červen 2015 – prosinec 2015 4) Sepsání literární rešerše zaměřené na metody detekce endokrinních disruptorů in vitro Rešerše bude sepsána s důrazem na detekci estrogenních a androgenních látek, budou diskutovány přístupy různých autorů, a výhody a nevýhody různých metod. V rešerši budou použity jak základní prameny (popisující in vitro systémy, které se již léta používají na našem pracovišti), tak především nejnovější poznatky z této oblasti. Zvláštní zřetel bude také věnován náročnosti testování, zda lze testovat i mimo laboratoře s flowboxy, atd. Termíny: návrh obsahu – 30.5.2015, hrubá verze I – 30.12.2015, hrubá verze II – 28.2.2016, finální verze I – 30.3.2016, poslední kontrola celé DP před odevzdáním – 20.4.2016