Acidorezistentní barvení

Úvodní slovo

Jako gramvariabilní či gramlabilní mikroorganizmy se označují ty, u nichž se v čisté kultuře část buněk obarví grampozitivně a část gramnegativně.

Acidorezistentní mikroorganizmy obsahují v buněčné stěně vysoký podíl glykolipidů, zejména mykolových kyselin, mastných kyselin a vyšších alkoholů. Z toho důvodu se neodbarvují anorganickými kyselinami ani směsí kyseliny a alkoholu při barvení dle Ziehl‑Neelsena. Acidorezistence má význam k odlišení některých bakteriálních druhů, např. Mycobacterium tuberculosis a M. leprae. Acidorezistentní bakterie jsou relativně nepropustné a rezistentní k slabým barvivům. Pokud se ale obarví barvivem se silnou barvicí schopností (např. bazický fuchsin rozpuštěný v 5 % fenolu), neodbarví se ani 20 % kyselinou sírovou. Acidorezistence závisí na integritě buňky, obsahu lipidů a pravděpodobně i na jejich zvláštním anatomickém uspořádání.

Vlastnosti vybraných mikroorganizmů

Acinetobacter

krátké tyčky až kokotyčky ve dvojicích či řetízcích; gramnegativní či gramvariabilní (obr. 78)

Corynebacterium

rovné či mírně zakřivené štíhlé tyčky se zúženými či ztluštělými konci (kyjovité formy) nebo v krátkých palisádách; grampozitivní; neacidorezistentní

Mycobacterium

rovné či mírně zakřivené tyčky, občas se větvící; netvoří vzdušné hyfy, konidie ani pouzdra; slabě grampozitivní; acidorezistentní; některé druhy rostou velice pomalu (až několik týdnů)

Nocardia

mírně či silně větvená vlákna substrátového mycelia rostoucí na povrchu nebo pronikající do agaru, tvorba redukovaného vzdušného mycelia; grampozitivní až gramvariabilní; někteří zástupci acidorezistentní

Rhodococcus

tyčky tvořící silně větvené substrátové mycelium, vlákna se rozpadají do krátkých tyček a koků; někteří zástupci produkují slabé vzdušné hyfy; grampozitivní, mohou být acidorezistentní

Seznam přístrojů, materiálu a mikroorganizmů

Mikroorganizmy

• Mycobacterium phlei CCM 5639 - acidorezistentní
• Nocardia carnea CCM 2756 - acidorezistentní
• Rhodococcus erythropolis CCM 277
• Corynebacterium glutamicum CCM 2428
• Acinetobacter grimontii CCM 7198^T

Postup

Acidorezistentní barvení dle Ziehl-Neelsena

• Připravit plamenem fixovaný preparát.
• Převrstvit koncentrovaným karbolfuchsinem, zahřát do výstupu par a v případě nutnosti doplňovat barvivo. Preparát zahřívat 3-5 minut (nesmí se vařit).
• Opláchnout kyselým alkoholem 2x, maximálně na 15 sekund.
• Dobarvit Löfflerovou metylenovou modří nebo malachitovou zelení po dobu 30 sekund.
• Opláchnout vodou a pozorovat při zvětšení 1000x.
• Červeně zbarvené acidorezistentní buňky by měly být dobře patrné proti zelenému či modrému pozadí (obr. 79).

Zhodnocení cvičení

Další informace k této problematice najdete v následující literatuře

Kontrolní otázky