14-3-3 proteiny patří do rodiny regulačních proteinů ovlivňujících biologické procesy u různých eukaryontních organizmů. V současnosti je známo více než 800 proteinů, které se po fosforylaci vážou do proteinu 14-3-3, což následně vede k modulaci jejich aktivity. Protein 14-3-3 dominantně tvoří v nativní formě dimerní strukturu. Nedávné studie ukázali, že i monomerní forma proteinu 14-3-3 zastává v organismu dosud nepopsané funkce. Dimer-monomerní rovnováha může být ovlivněna zavedením vybraných mutací na dimerním rozhraní proteinu 14-3-3. Tato diplomové práce se bude zabývat charakterizací specificky navrhnutých mutantů. Pro popis vlastností navrhnutých konstruktů 14-3-3zeta proteinu budou použity metody X-ray krystalografie, SAXS, nativní elektroforézy a titračních experimentů s fluorescenční detekcí. Student připraví všechny proteiny potřebné pro tento projekt včetně fluorescenčního značení. Diplomová práce může být zpracována v českém nebo anglickém jazyce. Literatura: (1) Sijbesma E., Skora L., Leysen S., Brunsveld L., Koch U., Nussbaumer P., Jahnke W., Ottmann C. Identification of Two Secondary Ligand Binding Sites in 14-3-3 Proteins Using Fragment Screening. Biochemistry 2017 56 (30), 3972-3982 (2) Hritz J.; Byeon I-J.; Krzysiak T.; Martinez A.; Sklenář V.; Gronenborn A.M. Dissection of binding between a phosphorylated tyrosine hydroxylase peptide and 14-3-3zeta: a complex story elucidated by NMR. Biophys. J. 2014, 107, 2185-2194 (3) Jansen S., Melková K., Trošanová Z., Hanáková K., Zachrdla M., Nováček J., Župa E.,Zdráhal Z., Hritz J., Žídek L.: Quantitative Mapping of MAP2c Phosphorylation and 14-3-3zeta Binding Sites Reveals Key Differences Between MAP2c and Tau. J. Biol. Chem. 2017, 292, 6715-6727 (4) Louša P., Nedozrálová H., Župa E., Nováček J., Hritz J.: Phosphorylation of the regulatory domain of human tyrosine hydroxylase 1 monitored using non-uniformly sampled NMR. Biophys. Chem. 2017, 223, 25-29